| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 引言 | 第12-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-31页 |
| 1.1 DNA甲基化 | 第13-25页 |
| 1.1.1 DNA甲基化的概念及其特点 | 第13页 |
| 1.1.2 DNA甲基化的生物学意义 | 第13-18页 |
| 1.1.2.1 DNA甲基化参与基因组防御 | 第14页 |
| 1.1.2.2 DNA甲基化调控基因表达 | 第14-16页 |
| 1.1.2.3 DNA甲基化与植物的正常生长发育 | 第16页 |
| 1.1.2.4 DNA甲基化与植物的春化作用及开花有关 | 第16-17页 |
| 1.1.2.5 DNA甲基化与转基因沉默 | 第17页 |
| 1.1.2.6 DNA甲基化与杂种优势 | 第17-18页 |
| 1.1.2.7 DNA甲基化与基因组印记 | 第18页 |
| 1.1.3 植物DNA甲基化的模式产生及其维持机制 | 第18-20页 |
| 1.1.4 DNA甲基化的遗传和变异 | 第20-21页 |
| 1.1.5 DNA甲基化的检测方法 | 第21-25页 |
| 1.1.5.1 基因组整体水平的甲基化检测 | 第21-23页 |
| 1.1.5.1.1 高效液相色谱法 | 第21-22页 |
| 1.1.5.1.2 SssI甲基转移酶法 | 第22页 |
| 1.1.5.1.3 免疫学法 | 第22页 |
| 1.1.5.1.4 氯乙醛反应法 | 第22-23页 |
| 1.1.5.2 基因特异位点甲基化水平的检测 | 第23-24页 |
| 1.1.5.2.1 酶切法 | 第23页 |
| 1.1.5.2.2 限制性酶PCR法 | 第23页 |
| 1.1.5.2.3 甲基化特异性PCR法 | 第23-24页 |
| 1.1.5.2.4 直接测序法 | 第24页 |
| 1.1.5.3 新甲基化位点的寻找 | 第24-25页 |
| 1.1.5.3.1 限制性标记基因组扫描 | 第24-25页 |
| 1.1.5.3.2 甲基化结合区柱层析法 | 第25页 |
| 1.1.5.3.3 联合甲基化敏感限制性内切酶的MBD法 | 第25页 |
| 1.2 玉米细胞质雄性不育 | 第25-31页 |
| 1.2.1 玉米细胞质雄性不育的分类 | 第26-27页 |
| 1.2.2 植物细胞质雄性不育的分子机制 | 第27-30页 |
| 1.2.2.1 线粒体DNA重排与CMS | 第28-29页 |
| 1.2.2.2 转录和翻译调控与CMS | 第29页 |
| 1.2.2.3 核质互作与CMS | 第29-30页 |
| 1.2.3 植物细胞质雄性不育系统的育性调控及其机制 | 第30页 |
| 1.2.4 玉米细胞质雄性不育在育种上的应用 | 第30-31页 |
| 1.3 甲基化与细胞质雄性不育 | 第31页 |
| 2 本研究的目的意义 | 第31-32页 |
| 3 材料和方法 | 第32-40页 |
| 3.1 供试材料 | 第32页 |
| 3.2 试剂、药品及仪器 | 第32-35页 |
| 3.2.1 试剂、药品 | 第32-33页 |
| 3.2.1.1 细胞核DNA提取所用试剂 | 第32-33页 |
| 3.2.1.2 线粒体DNA提取所用试剂 | 第33页 |
| 3.2.1.3 纯化DNA所用试剂 | 第33页 |
| 3.2.1.4 水解DNA所用试剂 | 第33页 |
| 3.2.1.5 实验药品 | 第33页 |
| 3.2.2 主要试剂的配置 | 第33-34页 |
| 3.2.3 主要仪器设备 | 第34-35页 |
| 3.3 方法 | 第35-40页 |
| 3.3.1 材料种植 | 第35页 |
| 3.3.2 田间育性鉴定和室内镜检 | 第35页 |
| 3.3.3 材料取样 | 第35页 |
| 3.3.4 玉米细胞核DNA的提取 | 第35-36页 |
| 3.3.5 玉米线粒体DNA的提取 | 第36-37页 |
| 3.3.6 DNA质量和浓度检测 | 第37页 |
| 3.3.7 HPLC法测定玉米DNA甲基化水平 | 第37-40页 |
| 3.3.7.1 纯化DNA | 第37-38页 |
| 3.3.7.2 水解DNA | 第38页 |
| 3.3.7.3 标准溶液的配置和标准方程的建立 | 第38页 |
| 3.3.7.4 高效液相色谱检测样品 | 第38-39页 |
| 3.3.7.5 精密度试验 | 第39页 |
| 3.3.7.6 重现性试验 | 第39页 |
| 3.3.7.7 稳定性试验 | 第39页 |
| 3.3.7.8 空白对照 | 第39页 |
| 3.3.7.9 数据统计与分析 | 第39-40页 |
| 4 结果与分析 | 第40-59页 |
| 4.1 育性鉴定 | 第40-41页 |
| 4.2 小孢子发育时期镜检 | 第41页 |
| 4.3 DNA的检测 | 第41-42页 |
| 4.3.1 线粒体DNA提取技术体系的优化 | 第41-42页 |
| 4.3.2 细胞核DNA提取技术体系的优化 | 第42页 |
| 4.4 线粒体DNA甲基化水平的检测 | 第42-48页 |
| 4.4.1 测定波长的选择 | 第42-43页 |
| 4.4.2 精密度实验 | 第43页 |
| 4.4.3 重现性实验 | 第43-44页 |
| 4.4.4 稳定性实验 | 第44页 |
| 4.4.5 空白对照 | 第44-45页 |
| 4.4.6 标准曲线和回归方程的建立 | 第45-46页 |
| 4.4.6.1 dC标准曲线的绘制 | 第45页 |
| 4.4.6.2 5mC标准曲线的绘制 | 第45-46页 |
| 4.4.7 待测样品的检测 | 第46-48页 |
| 4.4.7.1 待测样品的水解 | 第46-47页 |
| 4.4.7.2 待测样品的上样检测 | 第47-48页 |
| 4.5 细胞核DNA甲基化水平的检测 | 第48-51页 |
| 4.5.1 测定波长的选择 | 第48页 |
| 4.5.2 方法学考察 | 第48页 |
| 4.5.3 标准曲线和回归方程的建立 | 第48-50页 |
| 4.5.3.1 dC标准曲线的绘制 | 第48-49页 |
| 4.5.3.2 5mC标准曲线的绘制 | 第49-50页 |
| 4.5.4 样品的检测 | 第50-51页 |
| 4.6 同质异核材料DNA甲基化水平的比较 | 第51-55页 |
| 4.6.1 同质异核材料间线粒体DNA甲基化水平的比较分析 | 第51-53页 |
| 4.6.1.1 同一时期不同材料间线粒体DNA甲基化水平的比较分析 | 第51-52页 |
| 4.6.1.2 同一材料不同时期线粒体DNA甲基化水平的比较分析 | 第52-53页 |
| 4.6.2 同质异核材料间细胞核DNA甲基化水平的比较分析 | 第53-55页 |
| 4.6.2.1 同一时期不同材料间细胞核DNA甲基化水平的比较分析 | 第53-54页 |
| 4.6.2.2 同一材料不同时期细胞核DNA甲基化水平的比较分析 | 第54-55页 |
| 4.7 同核异质材料DNA甲基化水平的比较 | 第55-59页 |
| 4.7.1 同核异质材料间线粒体DNA甲基化水平的比较分析 | 第55-58页 |
| 4.7.2 同核异质材料间细胞核DNA甲基化水平的比较分析 | 第58-59页 |
| 4.7.2.1 同一时期不同材料间细胞核DNA甲基化水平的比较分析 | 第58-59页 |
| 4.7.2.2 同一材料不同时期细胞核DNA甲基化水平的比较分析 | 第59页 |
| 5 讨论 | 第59-64页 |
| 5.1 利用HPLC进行甲基化检测时样品DNA的制备 | 第59-60页 |
| 5.2 线粒体与细胞核甲基化水平检测体系的建立 | 第60-61页 |
| 5.3 同质异核、同核异质材料间DNA甲基化水平差异分析 | 第61-62页 |
| 5.4 玉米CMS及其保持系小孢子发育过程中的甲基化表现 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
