| 摘要 | 第8-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 中英文缩略表 | 第14-16页 |
| 引言 | 第16-18页 |
| 第一篇 文献综述 | 第18-52页 |
| 第一章 线粒体自噬的研究进展 | 第18-30页 |
| 1.1 自噬信号通路的调控 | 第19-23页 |
| 1.1.1 转录调节 | 第19-20页 |
| 1.1.2 转录后调节 | 第20-21页 |
| 1.1.3 翻译后调节 | 第21-23页 |
| 1.2 线粒体自噬信号通路的调控 | 第23-30页 |
| 1.2.1 BNIP3和NIX/BNIP3L对线粒体自噬的调控 | 第24-25页 |
| 1.2.2 FUNDC1对线粒体自噬的调控 | 第25页 |
| 1.2.3 缺氧对线粒体自噬调控 | 第25页 |
| 1.2.4 PINK1/Parkin对线粒体自噬的调控 | 第25-26页 |
| 1.2.5 DJ-1对线粒体自噬的调控 | 第26-27页 |
| 1.2.6 Parkin、PINK1和DJ-1直接或间接的相互作用 | 第27-30页 |
| 第二章 病毒感染与线粒体的研究进展 | 第30-52页 |
| 2.1 肝炎病毒 | 第32页 |
| 2.2 非洲淋巴细胞瘤病毒 | 第32-33页 |
| 2.3 人巨细胞病毒 | 第33页 |
| 2.4 伪狂犬病毒和单纯疱疹病毒 | 第33页 |
| 2.5 流感病毒 | 第33页 |
| 2.6 麻疹病毒 | 第33-34页 |
| 2.7 SARS-冠状病毒 | 第34-37页 |
| 参考文献 | 第37-52页 |
| 第二篇 试验部分 | 第52-134页 |
| 第三章 TGEV感染IPEC-J2细胞诱导线粒体损伤和自噬的研究 | 第52-82页 |
| 3.1 试验材料与方法 | 第53-62页 |
| 3.1.1 病毒 | 第53-54页 |
| 3.1.2 细胞 | 第54页 |
| 3.1.3 抗体和质粒 | 第54页 |
| 3.1.4 主要试剂 | 第54-55页 |
| 3.1.5 试验仪器 | 第55页 |
| 3.1.6 主要缓冲液及试剂配制 | 第55-56页 |
| 3.1.7 流式检测TGEV感染后线粒体膜电位、总量及功能的变化 | 第56页 |
| 3.1.8 TGEV感染后透射电镜观察线粒体形态变化 | 第56-57页 |
| 3.1.9 流式检测TGEV感染后细胞凋亡水平 | 第57页 |
| 3.1.10 免疫印记试验检测TGEV感染后细胞自噬蛋白变化 | 第57页 |
| 3.1.11 pLVX-mtio-mCherry和pTet-off-mTFPLC3构建及慢病毒包装 | 第57-59页 |
| 3.1.12 pLVX-mRFP-mWasabi-LC3和pLVX-mRFP-mWasabi-Bcl-xL载体的构建及慢病毒的包装 | 第59-61页 |
| 3.1.13 mito-mCherry和mTFP-LC3转染细胞检测线粒体自噬形成 | 第61-62页 |
| 3.1.14 Western-blot检测p62蛋白降解 | 第62页 |
| 3.1.15 mRFP-mWasabi-LC3荧光显微镜观察试验 | 第62页 |
| 3.1.16 mRFP-mWasabi-Bcl-xL共聚焦显微镜观察试验 | 第62页 |
| 3.2 结果 | 第62-74页 |
| 3.2.1 透射电镜观察线粒体自噬体 | 第62-63页 |
| 3.2.2 线粒体损伤和细胞凋亡的检测 | 第63-66页 |
| 3.2.3 Western-blot检测BECN1、LC3的转化 | 第66-67页 |
| 3.2.4 pLVX-mtiomCherry和pTet-off-mTFPLC3载体构建 | 第67-69页 |
| 3.2.5 mito-mCherry和mTFP-LC3转染细胞检测线粒体自噬形成 | 第69页 |
| 3.2.6 Western-blot检测p62蛋白降解 | 第69-70页 |
| 3.2.7 pLVX-mRFP-mWasbi-LC3和pLVX-mRFP-mWasabi-Bcl-xL构建 | 第70-71页 |
| 3.2.8 mRFP-mWasabi-LC3荧光显微镜观察试验 | 第71-72页 |
| 3.2.9 mRFP-mWasabi-Bcl-xL共聚焦显微镜观察试验 | 第72-74页 |
| 3.3 讨论 | 第74-77页 |
| 参考文献 | 第77-82页 |
| 第四章 线粒体自噬对TGEV复制和细胞凋亡影响的研究 | 第82-96页 |
| 4.1 材料和方法 | 第83-87页 |
| 4.1.1 病毒 | 第83页 |
| 4.1.2 细胞 | 第83页 |
| 4.1.3 抗体和干扰RNA质粒 | 第83-84页 |
| 4.1.4 主要试剂 | 第84页 |
| 4.1.5 试验仪器 | 第84页 |
| 4.1.6 主要缓冲液及试剂配制 | 第84页 |
| 4.1.7 pLVX-sh-ATG5和pLVX-sh-Control载体的构建及慢病毒的包装 | 第84-86页 |
| 4.1.8 CCK8实验检测药物对细胞活性的影响 | 第86页 |
| 4.1.9 自噬激活和抑制药物处理实验 | 第86-87页 |
| 4.1.10 干扰ATG5蛋白对TGEV复制的影响 | 第87页 |
| 4.1.11 自噬激活和抑制对TGEV感染引起的细胞凋亡的影响 | 第87页 |
| 4.2 结果 | 第87-91页 |
| 4.2.1 CCK8实验检测药物对细胞活性的影响 | 第87-88页 |
| 4.2.2 自噬激活和抑制药物处理对TGEV复制的影响 | 第88-89页 |
| 4.2.3 干扰ATG5蛋白对TGEV复制的影响 | 第89-90页 |
| 4.2.4 自噬激活和抑制对TGEV感染引起的细胞凋亡的影响 | 第90-91页 |
| 4.3 讨论 | 第91-93页 |
| 参考文献 | 第93-96页 |
| 第五章 线粒体氧化应激对TGEV诱导线粒体自噬影响的研究 | 第96-116页 |
| 5.1 材料和方法 | 第97-102页 |
| 5.1.1 病毒 | 第97页 |
| 5.1.2 细胞 | 第97页 |
| 5.1.3 抗体、表达质粒和干扰RNA质粒 | 第97页 |
| 5.1.4 主要试剂 | 第97-98页 |
| 5.1.5 试验仪器 | 第98页 |
| 5.1.6 主要缓冲液及试剂配制 | 第98页 |
| 5.1.7 细胞活性氧水平检测 | 第98-99页 |
| 5.1.8 细胞线粒体活性氧水平检测 | 第99页 |
| 5.1.9 细胞抗氧化基因mRNA水平检测 | 第99-100页 |
| 5.1.10 抑制氧化应激对细胞线粒体自噬的检测 | 第100-101页 |
| 5.1.11 抑制氧化应激对细胞凋亡的检测 | 第101页 |
| 5.1.12 识别线粒体氧化应激蛋白DJ-1的干扰对TGEV复制的影响 | 第101页 |
| 5.1.13 识别线粒体氧化应激蛋白DJ-1的干扰对线粒体自噬的影响 | 第101页 |
| 5.1.14 识别线粒体氧化应激蛋白DJ-1的干扰对细胞凋亡的影响 | 第101-102页 |
| 5.2 结果 | 第102-109页 |
| 5.2.1 细胞活性氧和线粒体活性氧水平检测 | 第102-103页 |
| 5.2.2 细胞抗氧化基因mRNA水平检测 | 第103页 |
| 5.2.3 抑制氧化应激对细胞自噬影响的检测 | 第103-105页 |
| 5.2.4 抑制氧化应激对细胞凋亡的检测 | 第105-106页 |
| 5.2.5 识别线粒体氧化应激蛋白DJ-1的干扰对TGEV复制的影响 | 第106-108页 |
| 5.2.6 识别线粒体氧化应激蛋白DJ-1的干扰对线粒体损伤的影响 | 第108页 |
| 5.2.7 识别线粒体氧化应激蛋白DJ-1的干扰对细胞凋亡的影响 | 第108-109页 |
| 5.3 讨论 | 第109-112页 |
| 参考文献 | 第112-116页 |
| 第六章 TGEV的N蛋白诱导线粒体自噬的研究 | 第116-134页 |
| 6.1 材料和方法 | 第117-121页 |
| 6.1.1 病毒 | 第117页 |
| 6.1.2 细胞 | 第117页 |
| 6.1.3 抗体和质粒 | 第117页 |
| 6.1.4 主要试剂 | 第117-118页 |
| 6.1.5 试验仪器 | 第118页 |
| 6.1.6 主要缓冲液及试剂配制 | 第118页 |
| 6.1.7 TGEV部分蛋白基因质粒构建和慢病毒包装 | 第118-119页 |
| 6.1.8 TGEV部分蛋白在细胞中的表达及亚细胞定位检测 | 第119页 |
| 6.1.9 N蛋白在细胞中与线粒体和自噬体的共定位观察 | 第119页 |
| 6.1.10 N蛋白对膜电位、线粒体数量、活性氧、线粒体活性氧和细胞凋亡的影响 | 第119-120页 |
| 6.1.11 TGEV感染的IPEC-J2细胞线粒体分离物中N蛋白及自噬蛋白的检测 | 第120页 |
| 6.1.12 富含线粒体的细胞成份的分离提取和病毒N蛋白的检测 | 第120-121页 |
| 6.2 结果 | 第121-128页 |
| 6.2.1 TGEV部分蛋白基因重组质粒构建 | 第121页 |
| 6.2.2 TGEV部分蛋白在细胞中的表达及亚细胞定位检测 | 第121-123页 |
| 6.2.3 N蛋白在细胞中与线粒体和自噬体的共定位观察 | 第123-124页 |
| 6.2.4 N蛋白对膜电位、线粒体数量、活性氧、线粒体活性氧和细胞凋亡的影响 | 第124-127页 |
| 6.2.5 TGEV感染的IPEC-J2细胞中N蛋白的线粒体和线粒体自噬的共定位检测 | 第127-128页 |
| 6.2.6 富含线粒体的细胞分离物中N蛋白及自噬蛋白的检测 | 第128页 |
| 6.3 讨论 | 第128-131页 |
| 参考文献 | 第131-134页 |
| 全文结论 | 第134-136页 |
| 本文创新点 | 第136-138页 |
| 致谢 | 第138-140页 |
| 攻读博士学位期间发表的文章 | 第140-141页 |
