| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第12-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-22页 |
| 1.1 单增李斯特菌简介 | 第13-16页 |
| 1.1.1 生物学特征 | 第13页 |
| 1.1.2 毒力因子 | 第13-15页 |
| 1.1.3 致病性 | 第15-16页 |
| 1.1.4 诊断与防治 | 第16页 |
| 1.2 双组份信号转导系统简介 | 第16-18页 |
| 1.2.1 双组分信号转导系统的组成 | 第16-17页 |
| 1.2.2 双组分信号转导系统的应答机制 | 第17-18页 |
| 1.3 单增李斯特菌的双组分信号转导系统的组成及功能 | 第18-19页 |
| 1.4 EutVW双组份系统研究概述 | 第19-22页 |
| 2 研究目的和意义 | 第22-23页 |
| 3 材料与方法 | 第23-38页 |
| 3.1 材料 | 第23-28页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第23页 |
| 3.1.2 实验动物和细胞系 | 第23-24页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第24-25页 |
| 3.1.4 主要试剂 | 第25页 |
| 3.1.5 主要溶液配制 | 第25-27页 |
| 3.1.6 引物 | 第27-28页 |
| 3.2 方法 | 第28-38页 |
| 3.2.1 LM201的RS08195/RS08200生物信息学分析 | 第28页 |
| 3.2.2 构建缺失突变株S6004 | 第28-33页 |
| 3.2.3 构建回复突变株S6006 | 第33页 |
| 3.2.4 生物学特性研究 | 第33-37页 |
| 3.2.5 转录组测序 | 第37-38页 |
| 4 结果与分析 | 第38-69页 |
| 4.1 RS08195/RS08200的生物信息学分析结果 | 第38-44页 |
| 4.2 缺失突变株S6004的构建 | 第44-47页 |
| 4.2.1 同源臂的PCR扩增 | 第44-45页 |
| 4.2.2 上下游同源臂over-lap连接 | 第45页 |
| 4.2.3 重组自杀质粒p5002的构建与鉴定 | 第45-46页 |
| 4.2.4 重组菌株S6003的构建 | 第46-47页 |
| 4.2.5 缺失突变株S6004的筛选 | 第47页 |
| 4.3 回复突变株S6006的构建 | 第47-50页 |
| 4.3.1 RS08195/RS08200基因的PCR扩增 | 第47-48页 |
| 4.3.2 重组质粒p5003的构建 | 第48页 |
| 4.3.3 回复突变株S6006的构建与鉴定 | 第48-49页 |
| 4.3.4 RT-PCR验证RS08195/RS08200的表达 | 第49-50页 |
| 4.4 37℃生长曲线测定 | 第50页 |
| 4.5 4℃生长曲线测定 | 第50-51页 |
| 4.6 生化特性测定 | 第51页 |
| 4.7 溶血性测定 | 第51-52页 |
| 4.8 氧化应激能力测定 | 第52-53页 |
| 4.9 生物被膜形成能力测定 | 第53页 |
| 4.10 牛奶增殖试验结果 | 第53-54页 |
| 4.11 Caco-2细胞的黏附、侵袭试验结果 | 第54-55页 |
| 4.12 RAW264.7细胞吞噬试验结果 | 第55页 |
| 4.13 线虫(C. elegans N2)毒力试验结果 | 第55-56页 |
| 4.14 小鼠毒力试验结果 | 第56-59页 |
| 4.14.1 小鼠半数致死量(LD50)的测定 | 第56-57页 |
| 4.14.2 组织载菌量的测定 | 第57-59页 |
| 4.15 转录组测序结果 | 第59-69页 |
| 4.15.1 RT-qPCR验证RNA-Seq结果 | 第59页 |
| 4.15.2 基因差异表达分析结果 | 第59-60页 |
| 4.15.3 RS08195/RS08200缺失对eut操纵子基因表达的影响 | 第60-61页 |
| 4.15.4 RS08195/RS08200缺失对毒力基因表达的影响 | 第61-62页 |
| 4.15.5 RS08195/RS08200缺失对其它TCSs表达的影响 | 第62-63页 |
| 4.15.6 差异基因GO富集分析结果 | 第63-66页 |
| 4.15.7 差异基因KEGG-Pathway富集分析结果 | 第66-69页 |
| 5 讨论 | 第69-72页 |
| 5.1 回复株S6006表型结果分析 | 第69-70页 |
| 5.2 缺失株S6004的生物学特性的初步探讨 | 第70页 |
| 5.3 RS08195/RS08200编码的TCS对毒力的影响 | 第70-71页 |
| 5.4 RS08195/RS08200编码的TCS与其它TCSs之间的关联 | 第71-72页 |
| 5.5 展望 | 第72页 |
| 6 结论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-80页 |
| 在读期间发表文章 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
