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厉眼蕈蚊传播核盘菌弱致病性相关DNA病毒1研究

摘要第9-12页
ABSTRACT第12-15页
缩略词表第16-18页
第一章 真菌病毒研究进展第18-41页
    1.1 真菌病毒的发现第18-19页
    1.2 真菌病毒的分类第19-22页
    1.3 研究真菌病毒的意义第22-28页
        1.3.1 真菌病毒对生物防治的意义第22-24页
        1.3.2 真菌病毒对病毒进化的意义第24-26页
        1.3.3 真菌病毒对理解病毒与寄主互作的意义第26-28页
    1.4 真菌病毒的传播第28-35页
        1.4.1 水平传播第28-30页
        1.4.2 垂直传播第30-31页
        1.4.3 人工转染第31-33页
        1.4.4 体外浸染第33-34页
        1.4.5 昆虫传播真菌病毒第34-35页
    1.5 真菌DNA病毒SSHADV-1第35-37页
    1.6 病毒、寄主及昆虫互作的研究第37-39页
    1.7 研究目的与思路第39-41页
第二章 厉眼蕈蚊获得SSHADV-1第41-73页
    2.1 引言第41-42页
    2.2 材料与方法第42-56页
        2.2.1 菌株及培养第42页
        2.2.2 昆虫饲养与鉴定第42-43页
        2.2.3 SsHADV-1 检测第43-47页
            2.2.3.1 厉眼蕈蚊DNA提取第43-44页
            2.2.3.2 厉眼蕈蚊总RNA提取第44页
            2.2.3.3 PCR检测及病毒基因组测序分析第44-46页
            2.2.3.4 PCR、RT-PCR、qRT-PCR检测第46-47页
        2.2.4 SsHADV-1 病毒粒子提取第47-48页
        2.2.5 Southern blot杂交第48-51页
        2.2.6 免疫荧光观察第51-54页
            2.2.6.1 厉眼蕈蚊幼虫及蛹体内病毒免疫荧光观察第51-53页
            2.2.6.2 厉眼蕈蚊成虫体内病毒免疫荧光观察第53-54页
        2.2.7 SsHADV-1 显微注射厉眼蕈蚊第54-55页
        2.2.8 厉眼蕈蚊获得SsHADV-1 检测第55-56页
            2.2.8.1 厉眼蕈蚊幼虫体表粘附核盘菌菌丝片段检测第55页
            2.2.8.2 厉眼蕈蚊幼虫获得SsHADV-1 检测第55页
            2.2.8.3 厉眼蕈蚊幼虫获得SsHADV-1 所需最短时间及携带病毒时间检测第55-56页
            2.2.8.4 厉眼蕈蚊经卵传递SsHADV-1 于后代检测第56页
    2.3 结果与分析第56-71页
        2.3.1 昆虫取食与鉴定第56-59页
        2.3.2 厉眼蕈蚊幼虫体表粘附菌丝片段第59-60页
        2.3.3 厉眼蕈蚊幼虫获得SsHADV-1第60-61页
        2.3.4 SsHADV-1 在厉眼蕈蚊体内表达分析第61-63页
        2.3.5 免疫荧光检测发现SsHADV-1 存在于厉眼蕈蚊组织内第63-69页
        2.3.6 厉眼蕈蚊幼虫获得病毒最短时间检测第69页
        2.3.7 厉眼蕈蚊将SsHADV-1 传给后代昆虫检测第69-71页
    2.4 讨论第71-73页
第三章 SSHADV-1 在草地螟夜蛾细胞内复制第73-96页
    3.1 引言第73页
    3.2 材料方法第73-81页
        3.2.1 菌株与细胞第73页
        3.2.2 Sf9细胞培养第73-74页
        3.2.3 病毒检测第74-75页
            3.2.3.1 Sf9细胞DNA和RNA提取第74页
            3.2.3.2 PCR、RT-PCR、qRT-PCR检测第74-75页
        3.2.4 Northern blot杂交第75-77页
        3.2.5 免疫荧光观察SsHADV-1 侵染的Sf9细胞第77页
        3.2.6 流式细胞仪测定病毒侵染率第77-78页
        3.2.7 SsHADV-1 在草地螟夜蛾细胞系(Sf9)中复制分析第78-81页
            3.2.7.1 SsHADV-1 侵染Sf9细胞第78-79页
            3.2.7.2 梯度稀释SsHADV-1 病毒粒子悬液侵染Sf9细胞分析第79页
            3.2.7.3 SsHADV-1 侵染时间与Sf9细胞感染率分析第79页
            3.2.7.4 SsHADV-1 侵染Sf9细胞的后代细胞的侵染率测定第79-80页
            3.2.7.5 SsHADV-1 在Sf9细胞中继代培养分析第80页
            3.2.7.6 SsHADV-1 侵染Sf9细胞后释放的病毒粒子侵染核盘菌分析第80-81页
        3.2.8 数据分析第81页
    3.3 结果与分析第81-94页
        3.3.1 SsHADV-1 在Sf9细胞中复制第81-83页
        3.3.2 梯度稀释的SsHADV-1 病毒粒子悬液侵染Sf9细胞第83-85页
        3.3.3 SsHADV-1 侵染不同时间点的Sf9细胞侵染率第85-87页
        3.3.4 SsHADV-1 侵染Sf9细胞的后代细胞第87-89页
        3.3.5 SsHADV-1 侵染Sf9细胞后释放再侵染Sf9能力第89-92页
        3.3.6 从Sf9细胞释放出的SsHADV-1 具有再侵染核盘菌的能力第92-94页
    3.4 讨论第94-96页
第四章 厉眼蕈蚊传播SSHADV-1第96-115页
    4.1 引言第96-97页
    4.2 材料与方法第97-102页
        4.2.1 菌株及培养第97页
        4.2.2 SsHADV-1 检测第97页
        4.2.3 Southern blot杂交第97-98页
        4.2.4 厉眼蕈蚊幼虫传播SsHADV-1 检测第98-99页
        4.2.5 厉眼蕈蚊幼虫传播SsHADV-1 所需最短时间测定第99页
        4.2.6 厉眼蕈蚊成虫在菌落上传播SsHADV-1 检测第99-100页
        4.2.7 厉眼蕈蚊卵传播SsHADV-1 检测第100页
        4.2.8 厉眼蕈蚊成虫在油菜上传播SsHADV-1 检测第100-101页
        4.2.9 传毒菌株生物学特性分析第101-102页
            4.2.9.1 菌落形态观察第101页
            4.2.9.2 菌核产量测定第101页
            4.2.9.3 生长速度测定第101-102页
            4.2.9.4 致病力测定第102页
            4.2.9.5 菌丝尖端形态观察第102页
        4.2.10 数据分析第102页
    4.3 结果与分析第102-113页
        4.3.1 厉眼蕈蚊幼虫传播SsHADV-1第102-104页
        4.3.2 厉眼蕈蚊幼虫最短传毒时间检测第104-105页
        4.3.3 厉眼蕈蚊成虫在核盘菌菌落上传播SsHADV-1第105-107页
        4.3.4 厉眼蕈蚊卵传播SsHADV-1第107-108页
        4.3.5 厉眼蕈蚊成虫在油菜上传播SsHADV-1第108-110页
        4.3.6 厉眼蕈蚊传毒菌株表型观察第110-113页
            4.3.6.1 厉眼蕈蚊幼虫传毒菌株表型观察第110-111页
            4.3.6.2 厉眼蕈蚊成虫在油菜上传毒菌株表型观察第111-113页
    4.4 讨论第113-115页
第五章 厉眼蕈蚊与SSHADV-1 互惠性互作第115-136页
    5.1 引言第115页
    5.2 材料与方法第115-123页
        5.2.1 菌株及培养第115-116页
        5.2.2 厉眼蕈蚊成虫对菌株DT-8 菌落产卵趋向性测定第116页
        5.2.3“Y”形管测试厉眼蕈蚊成虫选择菌株DT-8 菌落产卵的趋向性第116-117页
        5.2.4 核盘菌挥发物鉴定分析第117-119页
        5.2.5“Y”形管测试蘑菇醇和辛酮对厉眼蕈蚊成虫的作用第119-120页
        5.2.6 核盘菌蘑菇醇和辛酮合成相关基因的表达分析第120-122页
        5.2.7 SsHADV-1 对厉眼蕈蚊成虫怀卵量影响测定第122-123页
        5.2.8 数据分析第123页
    5.3 结果与分析第123-134页
        5.3.1 厉眼蕈蚊成虫趋向于菌株DT-8 菌落产卵第123-125页
        5.3.2 厉眼蕈蚊成虫趋向于菌株DT-8 产生的挥发性物质第125页
        5.3.3 核盘菌挥发物鉴定分析第125-128页
        5.3.4 蘑菇醇和辛酮对厉眼蕈蚊成虫具有显著的趋避作用第128-130页
        5.3.5 SsHADV-1 侵染核盘菌后部分蘑菇醇和辛酮合成相关基因下调表达第130-133页
        5.3.6 SsHADV-1 促进厉眼蕈蚊成虫产卵第133-134页
    5.4 讨论第134-136页
第六章 厉眼蕈蚊自然条件下携带真菌病毒检测第136-148页
    6.1 引言第136页
    6.2 材料与方法第136-138页
        6.2.1 油菜田厉眼蕈蚊观察第136页
        6.2.2 油菜田厉眼蕈蚊成虫携带SsHADV-1 检测第136-137页
        6.2.3 油菜田厉眼蕈蚊可能携带的真菌病毒种类检测第137-138页
    6.3 结果与分析第138-146页
        6.3.1 油菜田观察厉眼蕈蚊发生状况第138-139页
        6.3.2 油菜田检测厉眼蕈蚊成虫携带SsHADV-1第139-141页
        6.3.3 高通量测序检测厉眼蕈蚊携带的真菌病毒第141-146页
    6.4 讨论第146-148页
第七章 全文总结与展望第148-152页
    7.1 全文总结与创新第148-149页
    7.2 全文展望第149-152页
参考文献第152-177页
论文发表第177-178页
致谢第178-181页

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