| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 图表目录 | 第19-21页 |
| 缩略表 | 第21-24页 |
| 1 绪论 | 第24-46页 |
| 1.1 引言 | 第24-25页 |
| 1.2 雌激素信号通路概述 | 第25-31页 |
| 1.2.1 雌激素受体分子结构 | 第26-27页 |
| 1.2.2 雌激素受体的组织分布 | 第27-29页 |
| 1.2.3 雌激素信号通路与乳腺癌 | 第29-31页 |
| 1.3 昼夜节律与生物钟基因 | 第31-42页 |
| 1.3.1 昼夜节律钟系统 | 第32-35页 |
| 1.3.2 昼夜节律紊乱与代谢异常 | 第35-40页 |
| 1.3.3 昼夜节律紊乱与肿瘤 | 第40-42页 |
| 1.4 雌激素信号通路与昼夜节律间交互作用研究进展 | 第42-43页 |
| 1.5 本论文的选题依据和研究内容 | 第43-46页 |
| 1.5.1 选题依据 | 第44页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第44-46页 |
| 2 ERα对CLOCK蛋白水平的影响 | 第46-60页 |
| 2.1 引言 | 第46页 |
| 2.2 仪器与试剂 | 第46-49页 |
| 2.2.1 仪器 | 第46-47页 |
| 2.2.3 试剂 | 第47-48页 |
| 2.2.4 菌种、细胞及质粒 | 第48-49页 |
| 2.3 实验方法 | 第49-53页 |
| 2.3.1 质粒提取 | 第49页 |
| 2.3.2 细胞培养 | 第49页 |
| 2.3.3 细胞转染 | 第49页 |
| 2.3.4 细胞裂解 | 第49-50页 |
| 2.3.5 考马斯亮蓝法测蛋白浓度 | 第50页 |
| 2.3.6 SDS-PAGE电泳 | 第50-51页 |
| 2.3.7 湿法转膜 | 第51页 |
| 2.3.8 shERα质粒构建 | 第51-52页 |
| 2.3.9 琼脂糖凝胶回收 | 第52页 |
| 2.3.10 质粒转化 | 第52-53页 |
| 2.3.11 统计学分析方法 | 第53页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第53-57页 |
| 2.4.1 不同乳腺细胞中ERα和ERβ的蛋白水平 | 第53页 |
| 2.4.2 不同乳腺细胞系对E2的应答 | 第53-54页 |
| 2.4.3 ICI182780对CLOCK蛋白水平的影响 | 第54-55页 |
| 2.4.4 ERβ对CLOCK蛋白水平的影响 | 第55-56页 |
| 2.4.5 干涉ERα表达对CLOCK的蛋白水平的影响 | 第56-57页 |
| 2.4.6 过表达ERα对CLOCK蛋白水平的影响 | 第57页 |
| 2.5 讨论 | 第57-59页 |
| 2.6 小结 | 第59-60页 |
| 3 ERα对CLOCKmRNA水平的影响 | 第60-67页 |
| 3.1 引言 | 第60页 |
| 3.2 仪器与试剂 | 第60页 |
| 3.2.1 仪器 | 第60页 |
| 3.2.2 试剂 | 第60页 |
| 3.2.3 菌种、细胞及质粒 | 第60页 |
| 3.3 实验方法 | 第60-62页 |
| 3.3.1 细胞培养 | 第60页 |
| 3.3.2 细胞转染 | 第60-61页 |
| 3.3.3 质粒提取 | 第61页 |
| 3.3.4 RNA提取 | 第61页 |
| 3.3.5 反转录 | 第61页 |
| 3.3.6 Real-time PCR | 第61-62页 |
| 3.3.7 统计学分析方法 | 第62页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第62-65页 |
| 3.4.1 E2对CLOCK转录的影响 | 第62-64页 |
| 3.4.2 ICI182780对CLOCK转录的影响 | 第64页 |
| 3.4.3 ERa对CLOCK转录的调控 | 第64-65页 |
| 3.5 讨论 | 第65-66页 |
| 3.6 小结 | 第66-67页 |
| 4 ERa对CLOCK启动子活性的调控 | 第67-77页 |
| 4.1 引言 | 第67页 |
| 4.2 仪器与试剂 | 第67-68页 |
| 4.2.1 仪器 | 第67页 |
| 4.2.2 试剂 | 第67-68页 |
| 4.2.3 菌种、细胞及质粒 | 第68页 |
| 4.3 实验方法 | 第68-70页 |
| 4.3.1 质粒提取 | 第68页 |
| 4.3.2 CLOCK-WT-Luc质粒构建 | 第68-69页 |
| 4.3.3 细胞培养 | 第69页 |
| 4.3.4 荧光素酶报告基因实验 | 第69-70页 |
| 4.3.5 DNA琼脂糖凝胶回收 | 第70页 |
| 4.3.6 统计学分析方法 | 第70页 |
| 4.4 实验结果与分析 | 第70-75页 |
| 4.4.1 构建CLOCK-WT-Luc报告基因 | 第70-71页 |
| 4.4.2 REV-ERBα对CLOCK-WT-Luc活性的影响 | 第71页 |
| 4.4.3 ERα配体对CLOCK-WT-Luc活性的调控 | 第71-72页 |
| 4.4.4 ERα对CLOCK-WT-Luc活性的影响 | 第72-75页 |
| 4.5 讨论 | 第75-76页 |
| 4.6 小结 | 第76-77页 |
| 5 ERα与CLOCK启动子结合区域的检测 | 第77-88页 |
| 5.1 引言 | 第77页 |
| 5.2 仪器与试剂 | 第77-78页 |
| 5.2.1 仪器 | 第77页 |
| 5.2.2 试剂 | 第77-78页 |
| 5.2.3 菌种、细胞和质粒 | 第78页 |
| 5.3 实验方法 | 第78-84页 |
| 5.3.1 细胞培养 | 第78页 |
| 5.3.2 质粒提取 | 第78页 |
| 5.3.3 染色质免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP) | 第78-81页 |
| 5.3.4 细胞转染 | 第81页 |
| 5.3.5 荧光素酶报告基因实验 | 第81页 |
| 5.3.6 缺失突变体构建 | 第81-83页 |
| 5.3.7 点突变体的构建 | 第83-84页 |
| 5.3.8 统计学分析方法 | 第84页 |
| 5.4 实验结果与分析 | 第84-86页 |
| 5.4.1 ERE元件缺失对CLOCK报告基因活性的影响 | 第84页 |
| 5.4.2 ERE元件突变对CLOCK报告基因活性的影响 | 第84-85页 |
| 5.4.3 ERα结合到CLOCK启动子区域的检测 | 第85-86页 |
| 5.5 讨论 | 第86-87页 |
| 5.6 小结 | 第87-88页 |
| 6 CLOCK对细胞增殖功能的影响 | 第88-95页 |
| 6.1 引言 | 第88页 |
| 6.2 仪器与试剂 | 第88页 |
| 6.2.1 仪器 | 第88页 |
| 6.2.2 试剂 | 第88页 |
| 6.2.3 菌种、细胞和质粒 | 第88页 |
| 6.3 实验方法 | 第88-90页 |
| 6.3.1 质粒提取 | 第88-89页 |
| 6.3.2 细胞培养 | 第89页 |
| 6.3.3 细胞转染 | 第89页 |
| 6.3.4 MTT检测细胞增殖 | 第89页 |
| 6.3.5 克隆形成实验 | 第89页 |
| 6.3.6 软琼脂细胞培养 | 第89-90页 |
| 6.3.7 统计分析方法 | 第90页 |
| 6.4 实验结果与分析 | 第90-93页 |
| 6.4.1 降低CLOCK表达对细胞增殖的影响 | 第90-92页 |
| 6.4.2 过表达CLOCK对细胞增殖的影响 | 第92-93页 |
| 6.5 讨论 | 第93-94页 |
| 6.6 本章小结 | 第94-95页 |
| 7 结论与展望 | 第95-98页 |
| 7.1 结论 | 第95-96页 |
| 7.2 创新点摘要 | 第96页 |
| 7.3 展望 | 第96-98页 |
| 参考文献 | 第98-110页 |
| 作者简介 | 第110页 |
| 攻读博士学位期间科研项目及科研成果 | 第110-112页 |
| 致谢 | 第112-113页 |
