| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-22页 |
| 1.1 稀有糖 | 第10页 |
| 1.2 D-阿洛糖 | 第10-15页 |
| 1.2.1 D-阿洛糖的结构、理化性质及安全性 | 第10-11页 |
| 1.2.2 D-阿洛糖在大肠杆菌中的代谢途径 | 第11-12页 |
| 1.2.3 D-阿洛糖功能性质 | 第12-13页 |
| 1.2.4 D-阿洛糖的合成策略 | 第13-15页 |
| 1.3 产D-阿洛糖的酮醛糖异构酶研究进展 | 第15-19页 |
| 1.3.1 L-鼠李糖异构酶 | 第15-16页 |
| 1.3.2 核糖-5-磷酸异构酶 | 第16-18页 |
| 1.3.3 核糖-5-磷酸异构酶的结构及催化机理研究 | 第18-19页 |
| 1.3.4 生物合成D-阿洛糖 | 第19页 |
| 1.4 本课题的立题依据和意义 | 第19-20页 |
| 1.5 本课题研究思路与主要内容 | 第20-22页 |
| 第二章 Thermotoga lettingae TMO核糖-5-磷酸异构酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 | 第22-35页 |
| 2.1 前言 | 第22-23页 |
| 2.2 材料与方法 | 第23-28页 |
| 2.2.1 菌种与质粒 | 第23页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第23页 |
| 2.2.3 主要仪器 | 第23页 |
| 2.2.4 培养基配制 | 第23页 |
| 2.2.5 核糖-5-磷酸异构酶基因的克隆 | 第23-25页 |
| 2.2.6 含核糖-5-磷酸异构酶基因的表达载体的构建及转化 | 第25-27页 |
| 2.2.7 重组工程菌的表达及鉴定 | 第27-28页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第28-33页 |
| 2.3.1 Thermotoga lettingae TMO核糖-5-磷酸异构酶基因的扩增 | 第28-29页 |
| 2.3.2 克隆载体的构建 | 第29页 |
| 2.3.3 表达载体的构建 | 第29-30页 |
| 2.3.4 产物表达及活性的初步分析 | 第30-31页 |
| 2.3.5 诱导表达优化 | 第31-33页 |
| 2.4 本章小结 | 第33-35页 |
| 第三章 D-阿洛糖的分离纯化及鉴定 | 第35-44页 |
| 3.1 前言 | 第35页 |
| 3.2 材料与方法 | 第35-37页 |
| 3.2.1 主要试剂 | 第35页 |
| 3.2.2 主要仪器 | 第35-36页 |
| 3.2.3 D-阿洛糖的生物转化法制备 | 第36页 |
| 3.2.4 阴阳离子交换柱脱盐脱色 | 第36页 |
| 3.2.5 Ca~(2+)型离子交换柱层析 | 第36页 |
| 3.2.7 D-阿洛糖分离度计算 | 第36-37页 |
| 3.2.8 D-阿洛糖结晶分离 | 第37页 |
| 3.2.9 产物鉴定 | 第37页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第37-43页 |
| 3.3.1 Ca~(2+)型离子交换层析分离 | 第37-40页 |
| 3.3.2 LC-MS-MS鉴定 | 第40-42页 |
| 3.3.3 红外光谱鉴定 | 第42页 |
| 3.3.4 核磁共振鉴定 | 第42-43页 |
| 3.4 本章小结 | 第43-44页 |
| 第四章 重组T. lettinga核糖-5-磷酸异构酶的分离纯化及酶学性质研究 | 第44-56页 |
| 4.1 前言 | 第44页 |
| 4.2 材料与方法 | 第44-48页 |
| 4.2.1 菌种及保藏方法 | 第44页 |
| 4.2.2 主要实验材料 | 第44-45页 |
| 4.2.3 主要仪器 | 第45页 |
| 4.2.4 重组核糖-5-磷酸异构酶的分离纯化 | 第45-46页 |
| 4.2.5 重组核糖-5-磷酸异构酶的分子量测定 | 第46页 |
| 4.2.6 重组核糖-5-磷酸异构酶的活力测定方法 | 第46-47页 |
| 4.2.7 重组核糖-5-磷酸异构酶的等电点测定 | 第47页 |
| 4.2.8 pH对酶活力及稳定性的影响 | 第47页 |
| 4.2.9 温度对酶活力及热稳定性的影响 | 第47页 |
| 4.2.10 金属离子对酶活的影响 | 第47-48页 |
| 4.2.11 动力学参数测定 | 第48页 |
| 4.2.12 异构化反应平衡常数测定 | 第48页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第48-54页 |
| 4.3.1 重组核糖-5-磷酸异构酶的分子量测定 | 第48-49页 |
| 4.3.2 重组核糖-5-磷酸异构酶等电点测定 | 第49-50页 |
| 4.3.3 pH对酶活力及稳定性的影响 | 第50页 |
| 4.3.4 温度对酶活力及稳定性的影响 | 第50-51页 |
| 4.3.5 金属离子对酶活的影响 | 第51页 |
| 4.3.6 动力学参数测定 | 第51-53页 |
| 4.3.7 重组酶催化D-阿洛酮糖和D-阿洛糖之间异构化反应 | 第53-54页 |
| 4.4 本章小结 | 第54-56页 |
| 第五章 T. lettingae核糖-5-磷酸异构酶的分子改造及双酶共表达 | 第56-72页 |
| 5.1 前言 | 第56页 |
| 5.2 材料与方法 | 第56-62页 |
| 5.2.1 菌种与质粒 | 第56-57页 |
| 5.2.2 主要试剂 | 第57页 |
| 5.2.3 主要仪器 | 第57页 |
| 5.2.4 定点突变实验方法 | 第57-60页 |
| 5.2.5 共表达实验方法 | 第60-62页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第62-71页 |
| 5.3.1 重组T. lettingae核糖-5-磷酸异构酶的计算机模拟计算 | 第62-63页 |
| 5.3.2 突变位点确定 | 第63-64页 |
| 5.3.3 定点突变结果 | 第64-65页 |
| 5.3.4 突变表达产物的SDS-PAGE及活性分析 | 第65-66页 |
| 5.3.5 正向突变酶性质研究 | 第66-69页 |
| 5.3.6 共表达构建结果 | 第69-70页 |
| 5.3.7 E.coli BL21/pETDuet-Tlrpi-Ccdpe工程菌全细胞转化生产D-阿洛糖 | 第70-71页 |
| 5.4 本章小结 | 第71-72页 |
| 主要结论与展望 | 第72-74页 |
| 论文创新点 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-82页 |
| 附录：作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第82页 |
