| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 第一章 绪论 | 第11-30页 |
| 1.1 引言 | 第11页 |
| 1.2 双果糖酐 III | 第11-12页 |
| 1.2.1 双果糖酐 III 的性质 | 第11-12页 |
| 1.2.2 双果糖酐 III 的功能 | 第12页 |
| 1.2.3 双果糖酐 III 的生产 | 第12页 |
| 1.3 菊糖果糖转移酶 | 第12-15页 |
| 1.3.1 菊糖果糖转移酶的性质及催化机理 | 第12-15页 |
| 1.3.2 菊糖果糖转移酶的异源表达 | 第15页 |
| 1.4 毕赤酵母表达系统 | 第15-28页 |
| 1.4.1 毕赤酵母的甲醇代谢途径 | 第16-17页 |
| 1.4.2 毕赤酵母启动子 | 第17-21页 |
| 1.4.3 毕赤酵母菌株及载体 | 第21-23页 |
| 1.4.4 外源基因的整合及多拷贝插入 | 第23-25页 |
| 1.4.5 毕赤酵母表达的影响因素 | 第25-27页 |
| 1.4.6 毕赤酵母高密度发酵策略 | 第27-28页 |
| 1.5 本课题立题依据及意义 | 第28-29页 |
| 1.6 本课题研究思路与主要内容 | 第29-30页 |
| 第二章 不同启动子调控的 IFTase 重组毕赤酵母的构建 | 第30-44页 |
| 2.1 前言 | 第30页 |
| 2.2 材料与方法 | 第30-36页 |
| 2.2.1 菌种与质粒 | 第30-31页 |
| 2.2.2 主要仪器 | 第31页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第31页 |
| 2.2.4 培养基及常用溶液 | 第31-32页 |
| 2.2.5 ift 及 FLD1 基因的克隆 | 第32-33页 |
| 2.2.6 PAOX1-ift、PFLD1-ift 及 PGAP-ift 重组载体的构建 | 第33-34页 |
| 2.2.7 重组载体的毕赤酵母转化 | 第34页 |
| 2.2.8 重组酵母的高拷贝筛选及鉴定 | 第34页 |
| 2.2.9 重组酵母的 IFTase 表达 | 第34-35页 |
| 2.2.10 菊糖果糖转移酶的活性测定 | 第35-36页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第36-43页 |
| 2.3.1 PAOX1-ift、PFLD1-ift 及 PGAP-ift 重组载体构建示意图 | 第36-38页 |
| 2.3.2 ift 及 FLD1 基因的克隆 | 第38页 |
| 2.3.3 PAOX1-ift、PFLD1-ift 及 PGAP-ift 重组载体的构建 | 第38-40页 |
| 2.3.4 重组酵母菌株的筛选及鉴定 | 第40-41页 |
| 2.3.5 高拷贝重组酵母的筛选及对 IFTase 活性的影响 | 第41-43页 |
| 2.4 本章小结 | 第43-44页 |
| 第三章 不同启动子调控下重组酵母产 IFTase 的摇瓶发酵 | 第44-60页 |
| 3.1 前言 | 第44页 |
| 3.2 材料与方法 | 第44-46页 |
| 3.2.1 主要材料 | 第44页 |
| 3.2.2 主要仪器 | 第44-45页 |
| 3.2.3 菌种 | 第45页 |
| 3.2.4 培养基 | 第45页 |
| 3.2.5 GS115-PAOX1-IFTase 重组酵母的培养 | 第45页 |
| 3.2.6 GS115-PFLD1-IFTase 重组酵母的培养 | 第45页 |
| 3.2.7 GS115-PGAP-IFTase 重组酵母的培养 | 第45页 |
| 3.2.8 生物量的测定 | 第45-46页 |
| 3.2.9 菊糖果糖转移酶的活性测定 | 第46页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第46-59页 |
| 3.3.1 GS115-PAOX1-IFTase 重组酵母 IFTase 表达 | 第46-50页 |
| 3.3.2 GS115-PFLD1-IFTase 重组酵母 IFTase 表达 | 第50-55页 |
| 3.3.3 GS115-PGAP-IFTase 重组酵母 IFTase 表达 | 第55-59页 |
| 3.4 本章小结 | 第59-60页 |
| 第四章 不同启动子调控下重组酵母产 IFTase 的高密度发酵 | 第60-70页 |
| 4.1 前言 | 第60-61页 |
| 4.2 材料与方法 | 第61-64页 |
| 4.2.1 主要材料 | 第61页 |
| 4.2.2 主要仪器 | 第61页 |
| 4.2.3 菌种 | 第61页 |
| 4.2.4 培养基 | 第61-62页 |
| 4.2.5 GS115-PAOX1-IFTase 重组酵母的 3 L 发酵罐高密度发酵 | 第62页 |
| 4.2.6 GS115-PFLD1-IFTase 重组酵母的 3 L 发酵罐高密度发酵 | 第62-63页 |
| 4.2.7 GS115-PGAP-IFTase 重组酵母的 3 L 发酵罐高密度发酵 | 第63页 |
| 4.2.8 考马斯亮蓝法蛋白含量的检测 | 第63页 |
| 4.2.9 SDS-PAGE 蛋白电泳检测 | 第63页 |
| 4.2.10 AOX 酶活性检测 | 第63-64页 |
| 4.2.11 甘油及葡萄糖浓度的测定 | 第64页 |
| 4.2.12 菊糖果糖转移酶的活性测定 | 第64页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第64-69页 |
| 4.3.1 GS115-PAOX1-IFTase 高密度发酵分泌表达 IFTase | 第64-66页 |
| 4.3.2 GS115-PFLD1-IFTase 高密度发酵分泌表达 IFTase | 第66-67页 |
| 4.3.3 GS115-PGAP-IFTase 高密度发酵分泌表达 IFTase | 第67-69页 |
| 4.4 本章小结 | 第69-70页 |
| 第五章 重组 IFTase 的纯化及性质研究 | 第70-77页 |
| 5.1 前言 | 第70页 |
| 5.2 实验材料与方法 | 第70-72页 |
| 5.2.1 主要仪器 | 第70页 |
| 5.2.2 诱导型 IFTase 酶的纯化 | 第70-71页 |
| 5.2.3 组成型 IFTase 酶的纯化 | 第71页 |
| 5.2.4 IFTase 的 SDS-PAGE 蛋白电泳检测 | 第71页 |
| 5.2.5 pH 对酶活力及稳定性的影响 | 第71页 |
| 5.2.6 温度对酶活力及稳定性的影响 | 第71-72页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第72-76页 |
| 5.3.1 诱导型 IFTase 的纯化 | 第72-73页 |
| 5.3.2 组成型 IFTase 的纯化 | 第73-74页 |
| 5.3.3 IFTase 的酶学性质研究 | 第74-76页 |
| 5.4 本章小结 | 第76-77页 |
| 论文主要结论与展望 | 第77-79页 |
| 主要结论 | 第77-78页 |
| 展望 | 第78-79页 |
| 论文创新点 | 第79-81页 |
| 致谢 | 第81-83页 |
| 参考文献 | 第83-95页 |
| 附录：作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第95页 |
