| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第11-17页 |
| 1.1 研究背景 | 第11-13页 |
| 1.1.1 流感病毒概述 | 第11页 |
| 1.1.2 流感病毒的结构 | 第11-13页 |
| 1.2 2014-2015年 2.3.4.4 进化分支H5Nx亚型AIV感染情况概述 | 第13-14页 |
| 1.2.1 H5N2亚型AIV感染情况 | 第13页 |
| 1.2.2 H5N6亚型AIV感染情况 | 第13-14页 |
| 1.2.3 H5N8亚型AIV感染情况 | 第14页 |
| 1.3 NA在AIV传播中的角色 | 第14-15页 |
| 1.4 本研究的目的及意义 | 第15-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-30页 |
| 2.1 毒株 | 第17页 |
| 2.2 鸡胚及实验动物 | 第17页 |
| 2.3 细胞 | 第17-18页 |
| 2.4 主要试剂 | 第18页 |
| 2.5 主要仪器 | 第18页 |
| 2.6 SH7株反向遗传系统及部分毒株NA片段的构建 | 第18-25页 |
| 2.6.1 目的基因片段的扩增 | 第18-24页 |
| 2.6.1.1 目的基因片段扩增所需引物 | 第19页 |
| 2.6.1.2 病毒的RNA提取 | 第19页 |
| 2.6.1.3 病毒基因组的反转录 | 第19-20页 |
| 2.6.1.4 病毒cDNA的PCR扩增 | 第20页 |
| 2.6.1.5 目的基因片段的纯化 | 第20页 |
| 2.6.1.6 目的基因片段与pJET平端载体的连接 | 第20-21页 |
| 2.6.1.7 重组质粒的转化 | 第21页 |
| 2.6.1.8 阳性重组质粒的筛选 | 第21-22页 |
| 2.6.1.9 阳性菌的扩大培养以及质粒的抽提 | 第22-23页 |
| 2.6.1.10 含目的基因片段的pJET1.2 平端载体的酶切 | 第23页 |
| 2.6.1.11 目的基因片段与双向表达载体pHW2000连接 | 第23-24页 |
| 2.6.2 H5Nx重组病毒的拯救 | 第24-25页 |
| 2.6.2.1 H5Nx重组病毒的拯救 | 第24-25页 |
| 2.6.2.2 H5Nx重组病毒的传代 | 第25页 |
| 2.6.2.3 H5Nx重组病毒RNA的抽提和反转录 | 第25页 |
| 2.6.2.4 H5Nx重组病毒基因的扩增以及序列的测定 | 第25页 |
| 2.7 H5Nx重组病毒体外试验 | 第25-28页 |
| 2.7.1 H5Nx重组病毒蚀斑大小测定 | 第25-26页 |
| 2.7.2 H5Nx重组病毒豚鼠红细胞解凝试验 | 第26页 |
| 2.7.3 H5Nx重组病毒NA酶活性测定 | 第26-27页 |
| 2.7.4 H5Nx重组病毒CEF、DF1、MDCK增殖曲线测定 | 第27-28页 |
| 2.7.4.1 MOI计算方法 | 第27页 |
| 2.7.4.2 TCID_(50)测定方法 | 第27-28页 |
| 2.7.4.3 细胞数测定方法 | 第28页 |
| 2.7.4.4 鸡胚成纤维细胞（CEF）的制备 | 第28页 |
| 2.7.4.5 H5Nx重组病毒CEF、DF1和MDCK增殖曲线测定 | 第28页 |
| 2.8 病毒对SPF鸡的致病性 | 第28-29页 |
| 2.8.1 5 株H5Nx亚型AIVs鸡胚半数感染量（EID_(50)）测定 | 第28页 |
| 2.8.2 病毒对SPF鸡的致病性 | 第28-29页 |
| 2.8.3 病毒在SPF鸡拭子中病毒滴度测定 | 第29页 |
| 2.8.4 病毒在SPF鸡体内脏器中复制水平测定 | 第29页 |
| 2.9 病毒对SPF BALB/c小鼠的致病性 | 第29-30页 |
| 2.9.1 病毒在SPF BALB/c小鼠体内脏器中复制水平测定 | 第30页 |
| 2.9.2 5 株H5Nx亚型AIVs SPF BALB/c小鼠MLD_(50)的测定 | 第30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-44页 |
| 3.1 5 株H5Nx亚型AIVs的拯救与传代结果 | 第30页 |
| 3.2 5 株H5Nx亚型AIVs蚀斑大小测定情况 | 第30-32页 |
| 3.3 5 株H5Nx亚型AIVs豚鼠红细胞解凝试验结果 | 第32页 |
| 3.4 5 株H5Nx亚型AIVs的NA酶活性测定结果 | 第32-33页 |
| 3.5 5 株H5Nx亚型AIVs在CEF、DF1和MDCK生长曲线测定 | 第33-35页 |
| 3.6 病毒对SPF鸡致病性测定 | 第35-41页 |
| 3.6.1 5 株H5Nx亚型AIVs鸡胚半数感染量（EID_(50)）测定结果 | 第35页 |
| 3.6.2 病毒感染SPF鸡后死亡率 | 第35-36页 |
| 3.6.3 病毒感染SPF鸡后脏器复制水平 | 第36-39页 |
| 3.6.4 病毒感染SPF鸡后咽/泄殖腔拭子检测结果 | 第39-41页 |
| 3.6.5 血清抗体转阳情况测定结果 | 第41页 |
| 3.7 病毒对SPF BALB/c小鼠的致病性测定 | 第41-44页 |
| 3.7.1 SPF BALB/c小鼠感染后体重变化情况 | 第41页 |
| 3.7.2 SPF BALB/c小鼠感染后死亡率 | 第41-42页 |
| 3.7.3 SPF BALB/c小鼠感染后脏器病毒量检测结果 | 第42-43页 |
| 3.7.4 5 株H5Nx亚型AIVs SPF BALB/c小鼠MLD_(50)的测定结果 | 第43-44页 |
| 4 讨论 | 第44-49页 |
| 4.1 5 株H5Nx亚型AIVs在体外试验讨论 | 第44-46页 |
| 4.1.1 5 株H5Nx亚型AIVs蚀斑大小测定讨论 | 第44-45页 |
| 4.1.2 5 株H5Nx亚型AIVs的NA酶活性讨论 | 第45页 |
| 4.1.3 5 株H5Nx亚型AIVs的豚鼠红细胞解凝讨论 | 第45页 |
| 4.1.4 5 株H5Nx亚型AIVs在CEF、DF1和MDCK生长曲线测定讨论 | 第45-46页 |
| 4.2 5 株H5Nx亚型AIVs在体内试验讨论 | 第46-49页 |
| 4.2.1 5 株H5Nx亚型AIVs在SPF鸡体内试验讨论 | 第46-47页 |
| 4.2.2 5 株H5Nx亚型AIVs在SPF BALB/c小鼠体内试验讨论 | 第47-49页 |
| 全文总结 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-55页 |
| 附录A | 第55-57页 |
| 附录B | 第57页 |
