| 摘要 | 第3-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 第一章 引言 | 第20-35页 |
| 1 胆汁酸的研究概况 | 第20-23页 |
| 1.1 BAs的来源及其主要成分的合成代谢 | 第20-21页 |
| 1.2 TCA的研究概况 | 第21-23页 |
| 1.2.1 TCA的理化性质 | 第21-22页 |
| 1.2.2 TCA的生理功能和药理作用 | 第22页 |
| 1.2.3 TCA的不良反应 | 第22-23页 |
| 1.2.4 TCA及其他BAs的研究展望与应用前景 | 第23页 |
| 2 胆汁酸受体研究进展 | 第23-28页 |
| 2.1 TGR5受体的研究概况 | 第23-27页 |
| 2.1.1 BAs对TGR5受体作用 | 第26页 |
| 2.1.2 BAs激活TGR5受体的生物学效应 | 第26-27页 |
| 2.2 FXR受体的研究概况 | 第27-28页 |
| 2.3 BAs其他受体的研究概况 | 第28页 |
| 3 TGR5受体介导的相关信号转导途径 | 第28-33页 |
| 3.1 G蛋白和Gαq的研究概况 | 第29-31页 |
| 3.2 蛋白激酶C的研究概况 | 第31页 |
| 3.3 细胞外信号调节激酶的研究概况 | 第31-32页 |
| 3.4 肿瘤坏死因子-α 的研究概况 | 第32-33页 |
| 3.5 白细胞介素-1 的研究概况 | 第33页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第33-35页 |
| 第二章 TCA与TGR5相互作用的研究 | 第35-50页 |
| 1 实验材料 | 第35-36页 |
| 1.1 实验试剂、药品 | 第35页 |
| 1.2 质粒与细胞、组织 | 第35页 |
| 1.3 实验仪器 | 第35-36页 |
| 2 试验方法 | 第36-44页 |
| 2.1 TGR5真核表达载体的构建 | 第36-40页 |
| 2.1.1 引物设计与合成 | 第36页 |
| 2.1.2 PCMV-EGFP-TGR5真核表达载体构建[136] | 第36-40页 |
| 2.1.3 pCMV-TGR5载体构建 | 第40页 |
| 2.2 TGR5受体在HEK-293T细胞中的表达及测定 | 第40-43页 |
| 2.2.1 HEK-293T细胞的培养 | 第40-41页 |
| 2.2.2 TGR5在HEK-293T细胞中的瞬时转染 | 第41页 |
| 2.2.3 TCA对HEK-293T细胞毒性作用的测定 | 第41页 |
| 2.2.4 HEK-293T细胞中蛋白表达的测定 | 第41-42页 |
| 2.2.5 TCA对细胞内cAMP含量的影响 | 第42-43页 |
| 2.3 TCA与TGR5的结合活性的研究 | 第43-44页 |
| 2.3.1 不同浓度的TCA、TLCA对HEK-293T细胞产生cAMP的量效曲线分析 | 第43页 |
| 2.3.2 TCA作用于HEK-293T细胞后TGR5受体内陷的观察 | 第43-44页 |
| 3 数据处理和统计学分析 | 第44页 |
| 4 结果 | 第44-47页 |
| 4.1 含TGR5目的片段真核表达载体的构建 | 第44-45页 |
| 4.1.1 hTGR5基因扩增 | 第44页 |
| 4.1.2 重组质粒鉴定 | 第44-45页 |
| 4.2 TGR5在HEK-293T细胞中的转染效果 | 第45-46页 |
| 4.3 不同浓度TCA对HEK-293T细胞的毒性作用 | 第46页 |
| 4.4 不同浓度的TCA所产生的cAMP含量分析 | 第46-47页 |
| 4.5 不同浓度TCA、TLCA对cAMP影响的量效关系 | 第47页 |
| 5 讨论 | 第47-49页 |
| 6 小结 | 第49-50页 |
| 第三章 TCA对TGR5受体介导的NR8383细胞TNF-α 和IL-1β 表达的影响 | 第50-70页 |
| 1 实验材料 | 第50-51页 |
| 1.1 药品试剂 | 第50页 |
| 1.2 质粒与细胞、组织 | 第50-51页 |
| 1.3 实验仪器 | 第51页 |
| 2 研究内容和方法 | 第51-57页 |
| 2.1 NR8383细胞培养 | 第51页 |
| 2.2 TCA对NR8383细胞TGR5含量的影响 | 第51-53页 |
| 2.2.1 实验分组 | 第51页 |
| 2.2.2 RT-qPCR测定NR8383细胞中TGR5基因含量 | 第51-52页 |
| 2.2.3 Western blot检测NR8383细胞的TGR5蛋白含量 | 第52-53页 |
| 2.2.4 筛选NR8383细胞系后的检测 | 第53页 |
| 2.3 稳定表达TGR5的NR8383细胞系的建立 | 第53-55页 |
| 2.3.1 实验分组 | 第54页 |
| 2.3.2 ELISA法检测TCA对NR8383-TGR5细胞中的cAMP的影响 | 第54页 |
| 2.3.3 免疫荧光法检测TGR5受体表达定位 | 第54-55页 |
| 2.4 TCA对NR8383细胞和NR8383-TGR5细胞生成TNF-α 的影响 | 第55-56页 |
| 2.4.1 实验分组 | 第55页 |
| 2.4.2 RT-qPCR检测TNF-α 基因的表达 | 第55-56页 |
| 2.4.3 ELISA法检测TNF-α 蛋白含量的表达 | 第56页 |
| 2.5 TCA对NR8383细胞和NR8383-TGR5细胞生成IL-1β的影响 | 第56-57页 |
| 2.5.1 实验分组 | 第56页 |
| 2.5.2 RT-qPCR检测IL-1β mRNA的表达 | 第56页 |
| 2.5.3 IL-1β 蛋白在经处理的NR8383细胞和NR8383-TGR5细胞中的表达 | 第56-57页 |
| 3 数据处理和统计学分析 | 第57页 |
| 4 结果 | 第57-66页 |
| 4.1 TCA对NR8383细胞TGR5受体含量的影响 | 第57-61页 |
| 4.1.1 NR8383细胞中TGR5和β-actin熔解曲线 | 第57页 |
| 4.1.2 TCA对NR8383细胞中TGR5基因、蛋白含量的影响 | 第57-58页 |
| 4.1.3 NR8383-TGR5细胞中TGR5基因表达量测定 | 第58-59页 |
| 4.1.4 NR8383-TGR5细胞中TGR5蛋白表达及TGR5定位 | 第59-60页 |
| 4.1.5 TCA对cAMP含量的影响 | 第60-61页 |
| 4.2 TCA对NR8383细胞和NR8383-TGR5细胞生成TNF-α 的影响 | 第61-63页 |
| 4.2.1 TNF-α 扩增效率曲线 | 第61页 |
| 4.2.2 NR8383细胞和NR8383-TGR5细胞中TNF-α 基因的相对表达量 | 第61-62页 |
| 4.2.3 TCA对NR8383和NR8383-TGR5细胞中TNF-α 蛋白表达量的影响 | 第62-63页 |
| 4.3 TCA对NR8383细胞和NR8383-TGR5细胞生成IL-1β的影响 | 第63-66页 |
| 4.3.1 IL-1β 扩增效率曲线 | 第63-64页 |
| 4.3.2 TCA对NR8383和NR8383-TGR5细胞中IL-1βmRNA相对表达量的影响 | 第64-65页 |
| 4.3.3 TCA对NR8383和NR8383-TGR5细胞中IL-1β蛋白相对表达量的影响 | 第65-66页 |
| 5 讨论 | 第66-69页 |
| 5.1 TCA对NR8383细胞TGR5受体含量的影响 | 第66-67页 |
| 5.2 不同浓度的TCA对NR8383-TGR5细胞生成TNF-α、IL-1β的影响 | 第67-69页 |
| 6 小结 | 第69-70页 |
| 第四章 TCA对Gαq-PKC–ERK通路的影响 | 第70-86页 |
| 1 试验材料 | 第70页 |
| 1.1 药品试剂 | 第70页 |
| 1.2 细胞株 | 第70页 |
| 1.3 实验仪器 | 第70页 |
| 2 研究内容和方法 | 第70-75页 |
| 2.1 TCA对NR8383细胞和NR8383-TGR5细胞产生Gaq含量的影响 | 第70-72页 |
| 2.1.1 实验分组 | 第70-71页 |
| 2.1.2 RT-qPCR检测Gq mRNA的表达 | 第71-72页 |
| 2.1.3 在经处理的NR8383细胞和NR8383-TGR5细胞中的Gq蛋白相对表达量 | 第72页 |
| 2.2 TCA对NR8383细胞的PKC-ERK通路的影响 | 第72-74页 |
| 2.2.1 实验分组 | 第72-73页 |
| 2.2.2 TCA对PKC、ERK mRNA表达的影响 | 第73页 |
| 2.2.3 TCA对NR8383细胞中PKC、ERK蛋白表达的影响 | 第73-74页 |
| 2.3 TCA对经PD98059作用后的NR8383细胞TNF-α、IL-1β的影响 | 第74-75页 |
| 2.3.1 实验分组 | 第74页 |
| 2.3.2 RT-qPCR测定TNF-α、IL-1β含量 | 第74-75页 |
| 2.3.3 TCA对TNF-α、IL-1β 蛋白相对表达的影响 | 第75页 |
| 3 数据处理和统计学分析 | 第75页 |
| 4 结果 | 第75-84页 |
| 4.1 TCA对NR8383细胞和NR8383-TGR5细胞生成Gaq含量的影响 | 第75-77页 |
| 4.1.1 Gaq扩增效率曲线 | 第75-76页 |
| 4.1.2 NR8383细胞和NR8383-TGR5细胞中Gaq mRNA相对表达量的测定 | 第76页 |
| 4.1.3 NR8383细胞和NR8383-TGR5细胞中Gaq蛋白相对表达量的测定 | 第76-77页 |
| 4.2 TCA对NR8383细胞的PKC-ERK通路的影响 | 第77-81页 |
| 4.2.1 PKC、ERK mRNA的表达量 | 第77-79页 |
| 4.2.2 PKC、ERK蛋白在经处理的NR8383细胞中的相对表达 | 第79-81页 |
| 4.3 TCA经PKC-ERK通路对NR8383细胞分泌TNF-α、IL-1β的影响 | 第81-84页 |
| 4.3.1 TNF-α、IL-1β mRNA的表达量 | 第81-82页 |
| 4.3.2 TNF-α、IL-1β 蛋白在经处理的NR8383细胞中的相对表达 | 第82-84页 |
| 5 讨论 | 第84-85页 |
| 5.1 TCA对NR8383细胞和NR8383-TGR5细胞生成Gaq含量的影响 | 第84页 |
| 5.2 TCA对NR8383细胞的PKC-ERK通路的影响 | 第84-85页 |
| 5.3 TCA经PKC-ERK通路对NR8383细胞分泌TNF-α、IL-1β的影响 | 第85页 |
| 6 小结 | 第85-86页 |
| 全文讨论 | 第86-88页 |
| 全文结论 | 第88-89页 |
| 课题创新之处 | 第89-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-103页 |
| 作者简介 | 第103页 |
