摘要 | 第1-8页 |
ABSTRACT | 第8-14页 |
第一章 文献综述 | 第14-30页 |
1 细菌粘附的研究进展 | 第14-21页 |
·粘附素(adhensin) | 第15-18页 |
·受体(receptor) | 第18-20页 |
·细菌粘附粘膜细胞的过程 | 第20页 |
·粘附素与免疫防控 | 第20-21页 |
2 猪链球菌基因工程亚单位疫苗研究进展 | 第21-27页 |
·溶菌酶释放蛋白(MRP) | 第22-23页 |
·胞外因子(EF) | 第23-24页 |
·溶血素(SLY) | 第24页 |
·38kDa 蛋白 | 第24-25页 |
·三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH) | 第25页 |
·二氢硫辛酰胺脱氢酶(DLDH) | 第25-26页 |
·其他具免疫保护作用的蛋白 | 第26-27页 |
·重组亚单位串联苗的研究 | 第27页 |
3 工作展望 | 第27-30页 |
第二章 猪链球菌二氢硫辛酰胺脱氢酶基因的PCR 检测及序列分析 | 第30-40页 |
1 材料和方法 | 第30-34页 |
·菌株 | 第30-31页 |
·染色体DNA 的提取 | 第31页 |
·hm6 基因检测方法的建立 | 第31-32页 |
·hm6 基因的克隆 | 第32-33页 |
·hm6 基因序列分析 | 第33-34页 |
2 结果 | 第34-37页 |
·hm6 基因检测 | 第34-36页 |
·序列分析 | 第36-37页 |
3 讨论 | 第37-40页 |
第三章 二氢硫辛酰胺脱氢酶的原核表达、纯化及其生物特性初探 | 第40-52页 |
1 材料和方法 | 第40-46页 |
·菌株和细胞 | 第40页 |
·染色体DNA 的提取 | 第40-41页 |
·hm6 全基因扩增 | 第41页 |
·原核表达载体pET28a-HM6 的构建以及酶切鉴定 | 第41-43页 |
·HM6 融合蛋白的诱导表达 | 第43页 |
·SDS-PAGE 检测重组蛋白的表达 | 第43-44页 |
·HM6 融合蛋白的纯化 | 第44页 |
·HM6 融合蛋白的酶活性测定 | 第44-45页 |
·HM6 融合蛋白抗血清的制备 | 第45页 |
·猪链球菌粘附及粘附抑制试验 | 第45-46页 |
2 结果 | 第46-50页 |
·原核表达载体pET28a-HM6 的构建 | 第46-47页 |
·HM6 融合蛋白的诱导表达 | 第47页 |
·HM6 融合蛋白的纯化 | 第47-48页 |
·HM6 蛋白酶活性测定 | 第48页 |
·HM6 蛋白抗血清效价测定 | 第48页 |
·猪链球菌粘附及粘附抑制试验 | 第48-50页 |
3 讨论 | 第50-52页 |
第四章 猪链球菌2 型HA9801 串联表达蛋白对猪的免疫保护力评价 | 第52-60页 |
1 材料和方法 | 第53-55页 |
·菌株、试剂及仪器 | 第53页 |
·试验动物 | 第53页 |
·免疫原制备 | 第53页 |
·仔猪的主动免疫保护试验 | 第53-55页 |
2 结果 | 第55-57页 |
·免疫应答 | 第55-56页 |
·猪的免疫保护性评价 | 第56-57页 |
3 讨论 | 第57-60页 |
全文总结 | 第60-62页 |
参考文献 | 第62-72页 |
附录1 溶液配制 | 第72-74页 |
附录2 蛋白纯化步骤 | 第74-78页 |
1 纯化前试剂的配制 | 第74页 |
2 从菌体中提取蛋白 | 第74-75页 |
3 纯化前的蛋白处理(纯化的带His-Tag 蛋白以包涵体形式表达) | 第75页 |
4 镍柱法纯化蛋白 | 第75页 |
5 透析法进行蛋白复性(纯化的蛋白以包涵体形式表达) | 第75-78页 |
附录3 符号说明 | 第78-80页 |
攻读硕士学位期间发表论文 | 第80-82页 |
致谢 | 第82页 |