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猪链球菌二氢硫辛酰胺脱氢酶的生物学功能初探及串联蛋白的免疫保护评价

摘要第1-8页
ABSTRACT第8-14页
第一章 文献综述第14-30页
 1 细菌粘附的研究进展第14-21页
   ·粘附素(adhensin)第15-18页
   ·受体(receptor)第18-20页
   ·细菌粘附粘膜细胞的过程第20页
   ·粘附素与免疫防控第20-21页
 2 猪链球菌基因工程亚单位疫苗研究进展第21-27页
   ·溶菌酶释放蛋白(MRP)第22-23页
   ·胞外因子(EF)第23-24页
   ·溶血素(SLY)第24页
   ·38kDa 蛋白第24-25页
   ·三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)第25页
   ·二氢硫辛酰胺脱氢酶(DLDH)第25-26页
   ·其他具免疫保护作用的蛋白第26-27页
   ·重组亚单位串联苗的研究第27页
 3 工作展望第27-30页
第二章 猪链球菌二氢硫辛酰胺脱氢酶基因的PCR 检测及序列分析第30-40页
 1 材料和方法第30-34页
   ·菌株第30-31页
   ·染色体DNA 的提取第31页
   ·hm6 基因检测方法的建立第31-32页
   ·hm6 基因的克隆第32-33页
   ·hm6 基因序列分析第33-34页
 2 结果第34-37页
   ·hm6 基因检测第34-36页
   ·序列分析第36-37页
 3 讨论第37-40页
第三章 二氢硫辛酰胺脱氢酶的原核表达、纯化及其生物特性初探第40-52页
 1 材料和方法第40-46页
   ·菌株和细胞第40页
   ·染色体DNA 的提取第40-41页
   ·hm6 全基因扩增第41页
   ·原核表达载体pET28a-HM6 的构建以及酶切鉴定第41-43页
   ·HM6 融合蛋白的诱导表达第43页
   ·SDS-PAGE 检测重组蛋白的表达第43-44页
   ·HM6 融合蛋白的纯化第44页
   ·HM6 融合蛋白的酶活性测定第44-45页
   ·HM6 融合蛋白抗血清的制备第45页
   ·猪链球菌粘附及粘附抑制试验第45-46页
 2 结果第46-50页
   ·原核表达载体pET28a-HM6 的构建第46-47页
   ·HM6 融合蛋白的诱导表达第47页
   ·HM6 融合蛋白的纯化第47-48页
   ·HM6 蛋白酶活性测定第48页
   ·HM6 蛋白抗血清效价测定第48页
   ·猪链球菌粘附及粘附抑制试验第48-50页
 3 讨论第50-52页
第四章 猪链球菌2 型HA9801 串联表达蛋白对猪的免疫保护力评价第52-60页
 1 材料和方法第53-55页
   ·菌株、试剂及仪器第53页
   ·试验动物第53页
   ·免疫原制备第53页
   ·仔猪的主动免疫保护试验第53-55页
 2 结果第55-57页
   ·免疫应答第55-56页
   ·猪的免疫保护性评价第56-57页
 3 讨论第57-60页
全文总结第60-62页
参考文献第62-72页
附录1 溶液配制第72-74页
附录2 蛋白纯化步骤第74-78页
 1 纯化前试剂的配制第74页
 2 从菌体中提取蛋白第74-75页
 3 纯化前的蛋白处理(纯化的带His-Tag 蛋白以包涵体形式表达)第75页
 4 镍柱法纯化蛋白第75页
 5 透析法进行蛋白复性(纯化的蛋白以包涵体形式表达)第75-78页
附录3 符号说明第78-80页
攻读硕士学位期间发表论文第80-82页
致谢第82页

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