| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-6页 |
| 符号说明 | 第6-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-22页 |
| 1 干扰素研究进展 | 第10-16页 |
| ·干扰素的发现 | 第10页 |
| ·干扰素的分类与结构 | 第10-11页 |
| ·干扰素的一般特性 | 第11页 |
| ·干扰素的生物学活性 | 第11-14页 |
| ·抗病毒活性 | 第11-12页 |
| ·免疫调节活性 | 第12-13页 |
| ·抗肿瘤活性 | 第13页 |
| ·其他生物学活性 | 第13-14页 |
| ·干扰素的产生机理 | 第14页 |
| ·干扰素的临床应用 | 第14-15页 |
| ·人用干扰素 | 第14-15页 |
| ·动物用干扰素 | 第15页 |
| ·干扰素研究展望 | 第15-16页 |
| 2 鸡干扰素研究进展 | 第16-18页 |
| ·鸡干扰素 | 第16-17页 |
| ·鸡干扰素基因结构 | 第16-17页 |
| ·鸡干扰素功能与应用 | 第17页 |
| ·鸡γ干扰素 | 第17-18页 |
| ·鸡γ干扰素基因结构 | 第17页 |
| ·鸡γ干扰素功能与应用 | 第17-18页 |
| 3 鸡新城疫研究进展 | 第18-21页 |
| ·新城疫概述 | 第18页 |
| ·新城疫病毒分子生物学特征 | 第18-19页 |
| ·我国新城疫流行现状 | 第19页 |
| ·新城疫疫苗 | 第19-21页 |
| ·常规的灭活苗和弱毒疫苗 | 第19页 |
| ·基因工程疫苗 | 第19-20页 |
| ·反向遗传操作技术新疫苗 | 第20-21页 |
| 4 本研究的目的与意义 | 第21-22页 |
| 第二章 鸡α、γ干扰素的载体构建、原核表达及纯化 | 第22-45页 |
| 1 材料 | 第22-24页 |
| ·实验菌株 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22页 |
| ·主要仪器 | 第22-24页 |
| 2 实验方法 | 第24-37页 |
| ·鸡脾脏总RNA 的提取 | 第25页 |
| ·鸡干扰素基因的PCR 扩增 | 第25-29页 |
| ·引物设计与合成 | 第25-26页 |
| ·cDNA 的合成 | 第26-27页 |
| ·目的基因的扩增及纯化 | 第27页 |
| ·PCR 产物纯化、回收 | 第27-28页 |
| ·目的基因与pMD18-T 载体的连接 | 第28页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| ·重组质粒的转化 | 第29页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第29-31页 |
| ·重组质粒的菌液PCR 鉴定 | 第29-30页 |
| ·重组质粒的序列测定及分析 | 第30页 |
| ·重组质粒提取 | 第30-31页 |
| ·重组的双酶切鉴定 | 第31页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第31-32页 |
| ·PCR 产物与pET30a(+)质粒的酶切 | 第31页 |
| ·目的基因与重组表达质粒的连接 | 第31-32页 |
| ·重组表达质粒的转化 | 第32页 |
| ·鸡重组干扰素的诱导表达 | 第32-34页 |
| ·重组质粒的PCR 鉴定 | 第32-33页 |
| ·重组质粒双酶切鉴定 | 第33页 |
| ·目的蛋白的诱导表达 | 第33-34页 |
| ·诱导表达与SDS-PAGE 样品的制备 | 第33-34页 |
| ·SDS-PAGE 凝胶的制备与电泳 | 第34页 |
| ·鸡干扰素蛋白的制备 | 第34-37页 |
| ·鸡干扰素包涵体的提取 | 第34-35页 |
| ·鸡重组干扰素蛋白的变、复性和纯化 | 第35-36页 |
| ·鸡γ干扰素融合蛋白的纯化 | 第36-37页 |
| ·收集菌体沉淀 | 第36页 |
| ·超声裂解菌体 | 第36页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第36-37页 |
| ·鸡重组干扰素蛋白含量测定 | 第37页 |
| 3 结果 | 第37-43页 |
| ·鸡IFN- 及IFN-γ基因外引物扩增结果 | 第37页 |
| ·鸡IFN- 及IFN-γ基因内引物扩增结果 | 第37-38页 |
| ·鸡重组干扰素基因的菌液PCR 鉴定 | 第38-39页 |
| ·重组表达质粒的双酶切鉴定 | 第39页 |
| ·重组表达载体的测序和鉴定 | 第39-41页 |
| ·重组质粒的诱导表达结果 | 第41-42页 |
| ·重组蛋白的纯化结果 | 第42-43页 |
| ·鸡重组IFN- 和IFN-γ浓度测定 | 第43页 |
| 4 讨论 | 第43-45页 |
| 第三章 鸡重组干扰素抗新城疫病毒活性研究 | 第45-54页 |
| 1 材料 | 第45-46页 |
| ·重组干扰素蛋白 | 第45页 |
| ·病毒和培养细胞 | 第45页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第45-46页 |
| 2 实验方法 | 第46-47页 |
| ·鸡新城疫病毒半数细胞感染量（TCID50）的测定 | 第46页 |
| ·单一重组干扰素抗病毒活性检测 | 第46页 |
| ·联合重组干扰素抗病毒活性检测 | 第46-47页 |
| ·联合抗鸡胚感染病毒活性测定 | 第47页 |
| 3 结果 | 第47-53页 |
| ·新城疫病毒毒价测定 | 第47-48页 |
| ·单一干扰素抗新城疫病毒活性检测 | 第48-50页 |
| ·联合抗新城疫病毒活性检测 | 第50-51页 |
| ·联合抗鸡胚感染病毒活性测定 | 第51-53页 |
| 4 讨论 | 第53-54页 |
| 第四章 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-62页 |
| 附录I 试剂配置 | 第62-64页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65-67页 |