| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第8-15页 |
| 1.1 微生物的有机溶剂耐受性 | 第8页 |
| 1.2 有机溶剂对微生物细胞的影响 | 第8-9页 |
| 1.3 微生物溶剂耐受性机制的研究及进展 | 第9-13页 |
| 1.3.1 微生物溶剂耐受性的主要机制 | 第9-10页 |
| 1.3.2 提高微生物有机溶剂耐受性的主要方法 | 第10-13页 |
| 1.4 本课题研究意义和主要内容 | 第13-15页 |
| 1.4.1 课题来源 | 第13页 |
| 1.4.2 课题研究意义 | 第13-14页 |
| 1.4.3 本课题主要研究内容 | 第14-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-25页 |
| 2.1 实验材料 | 第15-16页 |
| 2.1.1 实验菌株与质粒 | 第15-16页 |
| 2.1.2 实验所用引物 | 第16页 |
| 2.1.3 实验仪器和试剂 | 第16页 |
| 2.1.4 主要培养基和溶液 | 第16页 |
| 2.2 实验方法 | 第16-25页 |
| 2.2.1 RT-PCR分析反应调节因子的表达水平 | 第16-17页 |
| 2.2.2 化学转化感受态细胞的制备及转化 | 第17-18页 |
| 2.2.3 重组菌株的构建 | 第18-19页 |
| 2.2.4 重组菌的蛋白表达分析及溶剂耐受性测定 | 第19-20页 |
| 2.2.5 敲除菌的构建 | 第20-21页 |
| 2.2.6 培养液中丁醇含量以及葡萄糖含量测定 | 第21页 |
| 2.2.7 细胞表面特性测定 | 第21-22页 |
| 2.2.8 突变文库的构建及筛选 | 第22-23页 |
| 2.2.9 等温滴定量热法测定分子间相互作用 | 第23-25页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第25-45页 |
| 3.1 溶剂压力应答途径的筛选 | 第25页 |
| 3.2 nlpE和spy的过表达、敲除及重组菌耐受性验证 | 第25-28页 |
| 3.2.1 nlpE和spy的重组表达 | 第26页 |
| 3.2.2 nlpE和spy的基因敲除 | 第26-27页 |
| 3.2.3 nlpE和spy重组菌耐受性验证 | 第27-28页 |
| 3.3 分子伴侣的重组表达及耐受性验证 | 第28-32页 |
| 3.4 secB随机突变文库的建立与筛选 | 第32-36页 |
| 3.4.1 突变文库的构建 | 第32-33页 |
| 3.4.2 突变文库的筛选 | 第33-36页 |
| 3.5 SecB突变株T10A丁醇耐受性机制的研究 | 第36-45页 |
| 3.5.1 SecB突变株T10A胞外丁醇含量的测定以及对于葡糖糖的利用分析 | 第38页 |
| 3.5.2 细胞表面特性测定 | 第38-39页 |
| 3.5.3 SecB T10位点的饱和突变 | 第39-41页 |
| 3.5.4 SecB_(T10A)突变株对不同有机溶剂的耐受性分析 | 第41-42页 |
| 3.5.5 SecB_(T10A)蛋白与底物蛋白preMBP的相互作用（ITC实验） | 第42-45页 |
| 主要结论和展望 | 第45-47页 |
| 主要结论 | 第45-46页 |
| 展望 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 附录 1：实验中所用的引物 | 第53-56页 |
| 附录 2：标准曲线 | 第56-57页 |
| 溶剂标准曲线 | 第56页 |
| 糖浓度标准曲线 | 第56-57页 |
| 附录 3：作者在攻读硕士期间发表的论文 | 第57页 |
