| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第7-13页 |
| 1.1 蛋白质天冬酰胺连接的糖基化简介 | 第7-10页 |
| 1.1.1 内质网多萜醇寡糖前体的合成 | 第7-8页 |
| 1.1.2 针对蛋白质特定部位的寡糖转接 | 第8-10页 |
| 1.1.3 高尔基体中寡糖链的修饰 | 第10页 |
| 1.2 绿色荧光蛋白简介 | 第10-11页 |
| 1.3 本论文的研究意义及其主要内容 | 第11-13页 |
| 1.3.1 本论文的研究意义 | 第11页 |
| 1.3.2 本论文主要研究内容 | 第11-13页 |
| 第二章 材料与方法 | 第13-28页 |
| 2.1 实验材料 | 第13-19页 |
| 2.1.1 菌株、质粒以及引物 | 第13-15页 |
| 2.1.2 酶、抗体及主要试剂 | 第15-16页 |
| 2.1.3 主要溶液和培养基的配制 | 第16-18页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第18-19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-28页 |
| 2.2.1 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第19页 |
| 2.2.2 重组质粒的构建 | 第19-21页 |
| 2.2.3 基因定点突变 | 第21-22页 |
| 2.2.4 CRISPR/Cas9基因敲除质粒的构建 | 第22-23页 |
| 2.2.5 细胞培养与转染 | 第23页 |
| 2.2.6 有限稀释法 | 第23-24页 |
| 2.2.7 基因敲除细胞株的获得 | 第24页 |
| 2.2.8 质粒线性化转染 | 第24-25页 |
| 2.2.9 流式细胞仪分析 | 第25页 |
| 2.2.10 基因组PCR | 第25页 |
| 2.2.11 蛋白质免疫印迹 | 第25-27页 |
| 2.2.12 动物细胞蛋白质提取及酶切 | 第27-28页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第28-42页 |
| 3.1 构建STT3A和STT3B单基因敲除细胞株 | 第28-30页 |
| 3.1.1 利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除STT3A | 第28-29页 |
| 3.1.2 利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除STT3B | 第29页 |
| 3.1.3 敲除细胞株中外源蛋白N-糖基化水平分析 | 第29-30页 |
| 3.2 STT3B依赖型Ng-mEGFP的筛选 | 第30-37页 |
| 3.2.1 构建内质网定位的Ng-mEGFP及其在野生型HEK293中性状分析 | 第30-33页 |
| 3.2.2 敲除细胞株中Ng-mEGFP性状分析 | 第33-37页 |
| 3.3 构建稳定表达mEGFP~(Q185N/N186C)的HEK293单细胞株 | 第37-39页 |
| 3.3.1 构建稳定表达mEGFP~(Q185N/N186C)的HEK293混合细胞株 | 第37-38页 |
| 3.3.2 筛选稳定表达mEGFP~(Q185N/N186C)的HEK293单细胞株 | 第38-39页 |
| 3.4 N-糖基化相关基因对15号细胞株的荧光影响分析 | 第39-42页 |
| 主要结论与展望 | 第42-43页 |
| 主要结论 | 第42页 |
| 展望 | 第42-43页 |
| 致谢 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-49页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的文章 | 第49页 |
