| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 引言 | 第16-24页 |
| 1.1 奶牛乳房炎的分类 | 第16-17页 |
| 1.1.1 临床型乳房炎 | 第16-17页 |
| 1.1.2 非临床型乳房炎 | 第17页 |
| 1.1.3 传染性乳房炎 | 第17页 |
| 1.1.4 环境性乳房炎 | 第17页 |
| 1.2 奶牛乳房炎的诊断方法 | 第17-18页 |
| 1.2.1 病原微生物的检测 | 第18页 |
| 1.2.2 加州乳房炎试验 | 第18页 |
| 1.2.3 乳汁中体细胞数直接检测 | 第18页 |
| 1.2.4 快速检测技术 | 第18页 |
| 1.3 无乳链球菌 | 第18-21页 |
| 1.3.1 无乳链球菌的生物学特征 | 第19页 |
| 1.3.2 无乳链球菌的毒力因子 | 第19-21页 |
| 1.4 无乳链球菌疫苗的研究现状 | 第21-23页 |
| 1.4.1 CPS疫苗 | 第21-22页 |
| 1.4.2 蛋白质疫苗 | 第22页 |
| 1.4.3 结合疫苗 | 第22页 |
| 1.4.4 DNA疫苗 | 第22-23页 |
| 1.5 选题的目的和意义 | 第23-24页 |
| 2 研究一 华北地区无乳链球菌的分离鉴定及生物学特性研究 | 第24-42页 |
| 2.1 试验材料 | 第24页 |
| 2.1.1 病料 | 第24页 |
| 2.1.2 培养基与主要试剂 | 第24页 |
| 2.1.3 分子生物学试剂 | 第24页 |
| 2.1.4 试验主要仪器 | 第24页 |
| 2.2 试验方法 | 第24-33页 |
| 2.2.1 病料的采集 | 第24-25页 |
| 2.2.2 病原菌的分离与培养 | 第25页 |
| 2.2.3 菌种保存 | 第25页 |
| 2.2.4 菌株的鉴定 | 第25-31页 |
| 2.2.5 小鼠致病性试验 | 第31页 |
| 2.2.6 药敏试验及耐药基因的检测 | 第31-33页 |
| 2.3 试验结果 | 第33-39页 |
| 2.3.1 细菌的分离培养与鉴定 | 第33-34页 |
| 2.3.2 菌株的鉴定 | 第34-39页 |
| 2.4 讨论 | 第39-41页 |
| 2.4.1 细菌的分离鉴定 | 第39页 |
| 2.4.2 血清型,表面蛋白及毒力因子分析 | 第39-40页 |
| 2.4.3 耐药性及耐药基因分析 | 第40-41页 |
| 2.5 小结 | 第41-42页 |
| 3 研究二 无乳链球菌产荚膜多糖培养基的优化 | 第42-54页 |
| 3.1 试验材料 | 第42页 |
| 3.1.1 菌种 | 第42页 |
| 3.1.2 培养基与主要试剂 | 第42页 |
| 3.1.3 试验主要仪器 | 第42页 |
| 3.2 试验方法 | 第42-45页 |
| 3.2.1 培养基选择 | 第42-43页 |
| 3.2.2 培养基的优化 | 第43页 |
| 3.2.3 培养条件的优化 | 第43-44页 |
| 3.2.4 菌液OD值的测量 | 第44页 |
| 3.2.5 荚膜多糖的测定 | 第44页 |
| 3.2.6 荚膜多糖的提取 | 第44-45页 |
| 3.2.7 荚膜多糖粗提物的纯化方式 | 第45页 |
| 3.2.8 纯化后的荚膜多糖中蛋白核酸残留分析 | 第45页 |
| 3.3 试验结果 | 第45-51页 |
| 3.3.1 培养基的选择结果 | 第45-48页 |
| 3.3.2 不同培养条件对无乳链球菌Ⅰa型荚膜形成的影响 | 第48-50页 |
| 3.3.3 荚膜多糖的提取 | 第50-51页 |
| 3.4 讨论 | 第51-53页 |
| 3.5 小结 | 第53-54页 |
| 4 研究三 Sip基因、FbsA基因及Sip-FbsA基因的克隆与原核表达 | 第54-67页 |
| 4.1 试验材料 | 第54页 |
| 4.1.1 菌种 | 第54页 |
| 4.1.2 培养基与主要试剂 | 第54页 |
| 4.1.3 试验主要仪器 | 第54页 |
| 4.2 试验方法 | 第54-60页 |
| 4.2.1 无乳链球菌基因组DNA的提取 | 第54页 |
| 4.2.2 Sip、FbsA、Sip-FbsA基因的PCR扩增 | 第54-57页 |
| 4.2.3 PCR产物的检测 | 第57页 |
| 4.2.4 Sip、FbsA和Sip-FbsA基因的回收及纯化 | 第57页 |
| 4.2.5 重组质粒pEASY-T1-Sip、pEASY-T1-FbsA、pEASY-T1-Sip-FbsA的构建 | 第57-58页 |
| 4.2.6 重组质粒的PCR鉴定 | 第58页 |
| 4.2.7 重组质粒的提取 | 第58-59页 |
| 4.2.8 重组质粒的双酶切鉴定 | 第59-60页 |
| 4.2.9 重组质粒的序列测定 | 第60页 |
| 4.3 试验结果 | 第60-65页 |
| 4.3.1 Sip、FbsA、Sip-FbsA基因的PCR扩增 | 第60页 |
| 4.3.2 重组质粒的双酶切鉴定 | 第60-61页 |
| 4.3.3 序列测定及相关分析 | 第61-65页 |
| 4.4 讨论 | 第65-66页 |
| 4.5 小结 | 第66-67页 |
| 5 研究四 Sip、FbsA、Sip-FbsA融合蛋白的诱导表达以及与CP的偶联 | 第67-81页 |
| 5.1 试验材料 | 第67-70页 |
| 5.1.1 表达载体 | 第67-68页 |
| 5.1.2 培养基与主要试剂 | 第68页 |
| 5.1.3 试验主要仪器 | 第68页 |
| 5.1.4 试验所需主要溶液的配制 | 第68-70页 |
| 5.2 试验方法 | 第70-73页 |
| 5.2.1 重组质粒pET32a-Sip、pET32a-FbsA、pET32a-Sip-FbsA的构建 | 第70-71页 |
| 5.2.2 阳性重组质粒菌种的保存 | 第71页 |
| 5.2.3 目的蛋白的诱导表达 | 第71-72页 |
| 5.2.4 目的蛋白的纯化 | 第72页 |
| 5.2.5 血清Ⅰa型荚膜多糖的活化衍生 | 第72-73页 |
| 5.2.6 血清Ⅰa型荚膜多糖与目的蛋白的偶联 | 第73页 |
| 5.2.7 偶联物的定性分析 | 第73页 |
| 5.3 试验结果 | 第73-80页 |
| 5.3.1 重组质粒的双酶切鉴定 | 第73页 |
| 5.3.2 目的蛋白最佳诱导条件的确定 | 第73-76页 |
| 5.3.3 重组蛋白的可溶性鉴定 | 第76-77页 |
| 5.3.4 Western Blot分析结果 | 第77-78页 |
| 5.3.5 目的蛋白的纯化 | 第78页 |
| 5.3.6 重组蛋白浓度的测定 | 第78-79页 |
| 5.3.7 CP+Sip-FbsA偶联物紫外光谱扫描结果 | 第79-80页 |
| 5.4 讨论 | 第80页 |
| 5.5 小结 | 第80-81页 |
| 6 研究五CP+Sip-FbsA偶联物免疫学特性的研究 | 第81-94页 |
| 6.1 试验材料 | 第81页 |
| 6.1.1 试验动物 | 第81页 |
| 6.1.2 主要试剂 | 第81页 |
| 6.2 试验方法 | 第81-85页 |
| 6.2.1 免疫动物、免疫程序及分组情况 | 第81-82页 |
| 6.2.2 免疫血清特异性抗体动态检测 | 第82-83页 |
| 6.2.3 偶联物免疫组中荚膜多糖和蛋白的特异性抗体检测 | 第83页 |
| 6.2.4 T淋巴细胞增殖试验 | 第83-84页 |
| 6.2.5 免疫大鼠全血的吞噬调理试验 | 第84页 |
| 6.2.6 流式细胞术测CD4+/CD8+ | 第84-85页 |
| 6.2.7 大鼠乳腺攻毒保护试验 | 第85页 |
| 6.3 试验结果 | 第85-92页 |
| 6.3.1 免疫血清特异性抗体动态检测 | 第85-86页 |
| 6.3.2 血清抗体效价检测结果 | 第86-87页 |
| 6.3.3 偶联物免疫组中荚膜多糖和蛋白的特异性抗体检测 | 第87-88页 |
| 6.3.4 T淋巴细胞增殖试验 | 第88-89页 |
| 6.3.5 免疫大鼠全血的吞噬调理试验 | 第89-90页 |
| 6.3.6 流式细胞术测CD4+/CD8+ | 第90页 |
| 6.3.7 大鼠乳腺攻毒保护试验 | 第90-92页 |
| 6.4 讨论 | 第92-93页 |
| 6.5 小结 | 第93-94页 |
| 7 整体结论 | 第94-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-102页 |
| 作者简介 | 第102页 |
