| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-23页 |
| 1.1 中华蜜蜂的生物学特征及重要地位 | 第12-13页 |
| 1.2 动物氧化还原体系 | 第13-15页 |
| 1.3 细胞色素P450氧化酶 | 第15-22页 |
| 1.3.1 细胞色素P450氧化酶的命名 | 第15-16页 |
| 1.3.2 细胞色素P450氧化酶的结构 | 第16-17页 |
| 1.3.3 细胞色素P450氧化酶的分布 | 第17-18页 |
| 1.3.4 细胞色素P450氧化酶的分类 | 第18页 |
| 1.3.5 细胞色素P450氧化酶的功能 | 第18-22页 |
| 1.4 本研究的目的及意义 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-25页 |
| 2.1.1 蜜蜂材料 | 第23页 |
| 2.1.2 菌株与质粒 | 第23页 |
| 2.1.3 酶与各种生化试剂 | 第23页 |
| 2.1.4 PCR引物 | 第23-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-40页 |
| 2.2.1 中华蜜蜂的饲养及处理 | 第25页 |
| 2.2.2 中华蜜蜂总RNA的提取、纯化及鉴定 | 第25-27页 |
| 2.2.2.1 总RNA的提取 | 第25-26页 |
| 2.2.2.2 总RNA的纯化 | 第26页 |
| 2.2.2.3 总RNA的琼脂糖-甲醛变性凝胶电泳鉴定 | 第26-27页 |
| 2.2.3 cDNA第一链合成 | 第27页 |
| 2.2.4 cDNA的纯化 | 第27页 |
| 2.2.5 cDNA5'末端的加尾反应 | 第27-28页 |
| 2.2.6 中华蜜蜂AccCYP336A1及AccCYP18A1基因cDNA全长序列的获取 | 第28-31页 |
| 2.2.6.1 AccCYP336A1及AccCYP18A1基因中间片段的获取 | 第28页 |
| 2.2.6.2 RACE法获得AccCYP336A1及AccCYP18A1基因 5'端序列 | 第28-29页 |
| 2.2.6.3 RACE法获得AccCYP336A1及AccCYP18A1基因 3'端序列 | 第29-30页 |
| 2.2.6.4 AccCYP336A1及AccCYP18A1基因全长cDNA序列的获得 | 第30-31页 |
| 2.2.7 目的DNA片段回收、连接及转化 | 第31-32页 |
| 2.2.7.1 目的DNA片段回收 | 第31页 |
| 2.2.7.2 目的DNA片段连接克隆载体 | 第31页 |
| 2.2.7.3 大肠杆菌E.coli感受态细胞的制备 | 第31-32页 |
| 2.2.7.4 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第32页 |
| 2.2.8 大肠杆菌质粒DNA的提取及酶切鉴定 | 第32-33页 |
| 2.2.8.1 质粒DNA的提取（试剂盒微量法） | 第32-33页 |
| 2.2.8.2 重组质粒DNA酶切鉴定 | 第33页 |
| 2.2.9 DNA测序 | 第33页 |
| 2.2.10 qRT-PCR分析基因的表达 | 第33-34页 |
| 2.2.10.1 引物、反应体系以及条件 | 第33-34页 |
| 2.2.10.2 qRT-PCR分析 | 第34页 |
| 2.2.10.3 数据处理 | 第34页 |
| 2.2.11 目的基因的原核表达及纯化 | 第34-37页 |
| 2.2.11.1 构建原核表达载体 | 第34-35页 |
| 2.2.11.2 诱导重组基因原核表达 | 第35页 |
| 2.2.11.3 纯化重组蛋白 | 第35页 |
| 2.2.11.4 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第35-37页 |
| 2.2.12 抗体的制备及检测 | 第37-38页 |
| 2.2.12.1 抗体的制备 | 第37页 |
| 2.2.12.2 ELISA检测抗体的效价 | 第37页 |
| 2.2.12.3 Western blot分析 | 第37-38页 |
| 2.2.13 数据库及网络资源 | 第38-39页 |
| 2.2.14 生物学软件 | 第39-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-57页 |
| 3.1 AccCYP336A1基因研究结果分析 | 第40-49页 |
| 3.1.1 AccCYP336A1基因全长cDNA的分离及序列分析 | 第40页 |
| 3.1.2 AccCYP336A1氨基酸序列结果特征分析 | 第40-42页 |
| 3.1.3 AccCYP336A1的表达特性分析 | 第42-45页 |
| 3.1.3.1 AccCYP336A1在不同发育时期以及不同组织部位中的表达特性 | 第42-43页 |
| 3.1.3.2 AccCYP336A1在不同非生物应激中的表达特性 | 第43-45页 |
| 3.1.4 AccCYP336A1的原核表达及抗体检测 | 第45-47页 |
| 3.1.5 AccCYP336A1在不同非生物应激中的蛋白表达特性 | 第47-48页 |
| 3.1.6 AccCYP336A1体外蛋白功能验证 | 第48-49页 |
| 3.2 AccCYP18A1基因研究结果分析 | 第49-57页 |
| 3.2.1 AccCYP18A1基因全长cDNA的分离及序列分析 | 第49-50页 |
| 3.2.2 AccCYP18A1氨基酸序列结果特征分析 | 第50页 |
| 3.2.3 AccCYP18A1的表达特性分析 | 第50-53页 |
| 3.2.3.1 AccCYP18A1在不同发育时期和不同组织部位的表达特性 | 第50-52页 |
| 3.2.3.2 AccCYP18A1在不同非生物应激中的表达特性 | 第52-53页 |
| 3.2.4 AccCYP18A1的原核表达及抗体检测 | 第53-55页 |
| 3.2.5 AccCYP18A1在不同非生物应激中的蛋白表达特性 | 第55-57页 |
| 4 讨论 | 第57-60页 |
| 4.1 AccCYP336A1基因研究讨论 | 第57-59页 |
| 4.1.1 AccCYP336A1基因序列 | 第57页 |
| 4.1.2 AccCYP336A1基因表达特性 | 第57-59页 |
| 4.2 AccCYP18A1基因研究结果讨论 | 第59-60页 |
| 4.2.1 AccCYP18A1基因序列 | 第59页 |
| 4.2.2 AccCYP18A1基因表达特性 | 第59-60页 |
| 5 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 攻读学位期间发表及拟发表论文情况 | 第66页 |
