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趋磁螺菌Magnetospirillum gryphiswaldense MSR-1中mamZ基因功能分析

摘要第3-4页
ABSTRACT第4页
第一章 绪论第10-23页
    1.1 趋磁细菌和磁小体第10-14页
        1.1.1 趋磁细菌的人工培养第10-11页
        1.1.2 趋磁细菌的分类现状第11-12页
        1.1.3 磁小体的特点第12-14页
    1.2 基因组上的磁小体岛第14-21页
    1.3 本研究立题依据和研究路线第21-23页
第二章 趋磁螺菌MSR-1 MamZ蛋白的生物信息学分析第23-35页
    2.1 前言第23页
    2.2 材料和方法第23-25页
        2.2.1 GO分析以及氨基酸序列结合位点预测第23-24页
        2.2.2 ProtScale分析MamZ蛋白的亲疏水性第24页
        2.2.3 TMHMM分析MamZ蛋白的跨膜螺旋第24页
        2.2.4 MamZ蛋白同源性比对第24-25页
    2.3 结果与分析第25-34页
        2.3.1 mamZ在MSR-1 基因组上的定位第25-26页
        2.3.2 MamZ蛋白在细胞中的功能预测第26-34页
    2.4 小结与分析第34-35页
第三章 mamZ缺失突变株和回补菌株的构建及检测第35-56页
    3.1 前言第35页
    3.2 材料和方法第35-47页
        3.2.1 化学药品和试剂第35页
        3.2.2 培养基第35-37页
        3.2.3 抗生素第37页
        3.2.4 菌株及质粒第37-38页
        3.2.5 质粒小量提取第38-40页
        3.2.6 MSR-1 基因组 DNA 的提取第40-41页
        3.2.7 限制性酶切反应第41-42页
        3.2.8 目的基因的胶回收第42-43页
        3.2.9 DNA片断的连接第43页
        3.2.10 琼脂糖凝胶电泳第43页
        3.2.11 E.coli感受态的制备第43-44页
        3.2.12 热激转化第44页
        3.2.13 E.coli S17-1 和趋磁细菌 MSR-1 的双亲接合实验第44-45页
        3.2.14 菌落PCR法快速检测细菌质粒第45页
        3.2.15 缺失突变株的构建第45-46页
        3.2.16 互补菌株的构建第46-47页
    3.3 实验结果第47-55页
        3.3.1 mamZ缺失突变株的构建第47-53页
        3.3.2 互补菌株的构建及验证第53-55页
    3.4 小结与讨论第55-56页
        3.4.1 小结第55页
        3.4.2 讨论第55-56页
第四章 mamZ的缺失对细胞表型及生理特征的影响第56-70页
    4.1 前言第56页
    4.2 材料和方法第56-58页
        4.2.1 细胞的生长和磁响应(Cmag)曲线的测定第56页
        4.2.2 细胞的胞内铁含量测定第56-57页
        4.2.3 培养基中剩余铁含量的测定第57页
        4.2.4 透射电镜观察磁小体和能谱检测第57-58页
        4.2.5 常温磁滞回线和一阶翻转曲线(FORCs)第58页
    4.3 实验结果与分析第58-66页
        4.3.1 细胞的生长和磁响应水平检测第58-59页
        4.3.2 胞内铁含量和培养基中剩余铁浓度的检测第59-61页
        4.3.3 高分辨透射电镜观察各菌株的胞内磁小体第61-63页
        4.3.4 各菌株磁小体的磁学性质分析第63-66页
    4.4 小结与讨论第66-70页
        4.4.1 小结第66页
        4.4.2 讨论第66-70页
第五章 mamZ的缺失对MAI上基因转录水平的影响第70-83页
    5.1 前言第70页
    5.2 材料和方法第70-72页
        5.2.1 Trizol法提取细菌的总RNA第70-71页
        5.2.2 RT第71页
        5.2.3 荧光定量PCR第71-72页
    5.3 实验结果与分析第72-81页
        5.3.1 cDNA的获得第72-76页
        5.3.2 荧光定量PCR检测磁小体岛上基因的表达第76-81页
    5.4 小结与讨论第81-83页
        5.4.1 小结第81页
        5.4.2 讨论第81-83页
第六章 结论与展望第83-86页
    6.1 总结第83-84页
    6.2 展望第84-86页
附录 趋磁螺菌MSR-1 MamXY复合体的鉴定第86-96页
    1.1 前言第86页
    1.2 实验结果与分析第86-95页
        1.2.1 MSR-1 的 WT 和 overexp-fts Z-like 的生长和磁响应水平检测第86-87页
        1.2.2 透射电镜观察 overexp-fts Z-like 的胞内磁小体第87-89页
        1.2.3 磁小体膜蛋白交联反应条件的摸索第89-94页
        1.2.4 不同磁相应水平下菌株的MamXY四个蛋白的特点第94-95页
    1.3 小结与讨论第95-96页
参考文献第96-102页
致谢第102页

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