摘要 | 第3-4页 |
ABSTRACT | 第4页 |
第一章 绪论 | 第10-23页 |
1.1 趋磁细菌和磁小体 | 第10-14页 |
1.1.1 趋磁细菌的人工培养 | 第10-11页 |
1.1.2 趋磁细菌的分类现状 | 第11-12页 |
1.1.3 磁小体的特点 | 第12-14页 |
1.2 基因组上的磁小体岛 | 第14-21页 |
1.3 本研究立题依据和研究路线 | 第21-23页 |
第二章 趋磁螺菌MSR-1 MamZ蛋白的生物信息学分析 | 第23-35页 |
2.1 前言 | 第23页 |
2.2 材料和方法 | 第23-25页 |
2.2.1 GO分析以及氨基酸序列结合位点预测 | 第23-24页 |
2.2.2 ProtScale分析MamZ蛋白的亲疏水性 | 第24页 |
2.2.3 TMHMM分析MamZ蛋白的跨膜螺旋 | 第24页 |
2.2.4 MamZ蛋白同源性比对 | 第24-25页 |
2.3 结果与分析 | 第25-34页 |
2.3.1 mamZ在MSR-1 基因组上的定位 | 第25-26页 |
2.3.2 MamZ蛋白在细胞中的功能预测 | 第26-34页 |
2.4 小结与分析 | 第34-35页 |
第三章 mamZ缺失突变株和回补菌株的构建及检测 | 第35-56页 |
3.1 前言 | 第35页 |
3.2 材料和方法 | 第35-47页 |
3.2.1 化学药品和试剂 | 第35页 |
3.2.2 培养基 | 第35-37页 |
3.2.3 抗生素 | 第37页 |
3.2.4 菌株及质粒 | 第37-38页 |
3.2.5 质粒小量提取 | 第38-40页 |
3.2.6 MSR-1 基因组 DNA 的提取 | 第40-41页 |
3.2.7 限制性酶切反应 | 第41-42页 |
3.2.8 目的基因的胶回收 | 第42-43页 |
3.2.9 DNA片断的连接 | 第43页 |
3.2.10 琼脂糖凝胶电泳 | 第43页 |
3.2.11 E.coli感受态的制备 | 第43-44页 |
3.2.12 热激转化 | 第44页 |
3.2.13 E.coli S17-1 和趋磁细菌 MSR-1 的双亲接合实验 | 第44-45页 |
3.2.14 菌落PCR法快速检测细菌质粒 | 第45页 |
3.2.15 缺失突变株的构建 | 第45-46页 |
3.2.16 互补菌株的构建 | 第46-47页 |
3.3 实验结果 | 第47-55页 |
3.3.1 mamZ缺失突变株的构建 | 第47-53页 |
3.3.2 互补菌株的构建及验证 | 第53-55页 |
3.4 小结与讨论 | 第55-56页 |
3.4.1 小结 | 第55页 |
3.4.2 讨论 | 第55-56页 |
第四章 mamZ的缺失对细胞表型及生理特征的影响 | 第56-70页 |
4.1 前言 | 第56页 |
4.2 材料和方法 | 第56-58页 |
4.2.1 细胞的生长和磁响应(Cmag)曲线的测定 | 第56页 |
4.2.2 细胞的胞内铁含量测定 | 第56-57页 |
4.2.3 培养基中剩余铁含量的测定 | 第57页 |
4.2.4 透射电镜观察磁小体和能谱检测 | 第57-58页 |
4.2.5 常温磁滞回线和一阶翻转曲线(FORCs) | 第58页 |
4.3 实验结果与分析 | 第58-66页 |
4.3.1 细胞的生长和磁响应水平检测 | 第58-59页 |
4.3.2 胞内铁含量和培养基中剩余铁浓度的检测 | 第59-61页 |
4.3.3 高分辨透射电镜观察各菌株的胞内磁小体 | 第61-63页 |
4.3.4 各菌株磁小体的磁学性质分析 | 第63-66页 |
4.4 小结与讨论 | 第66-70页 |
4.4.1 小结 | 第66页 |
4.4.2 讨论 | 第66-70页 |
第五章 mamZ的缺失对MAI上基因转录水平的影响 | 第70-83页 |
5.1 前言 | 第70页 |
5.2 材料和方法 | 第70-72页 |
5.2.1 Trizol法提取细菌的总RNA | 第70-71页 |
5.2.2 RT | 第71页 |
5.2.3 荧光定量PCR | 第71-72页 |
5.3 实验结果与分析 | 第72-81页 |
5.3.1 cDNA的获得 | 第72-76页 |
5.3.2 荧光定量PCR检测磁小体岛上基因的表达 | 第76-81页 |
5.4 小结与讨论 | 第81-83页 |
5.4.1 小结 | 第81页 |
5.4.2 讨论 | 第81-83页 |
第六章 结论与展望 | 第83-86页 |
6.1 总结 | 第83-84页 |
6.2 展望 | 第84-86页 |
附录 趋磁螺菌MSR-1 MamXY复合体的鉴定 | 第86-96页 |
1.1 前言 | 第86页 |
1.2 实验结果与分析 | 第86-95页 |
1.2.1 MSR-1 的 WT 和 overexp-fts Z-like 的生长和磁响应水平检测 | 第86-87页 |
1.2.2 透射电镜观察 overexp-fts Z-like 的胞内磁小体 | 第87-89页 |
1.2.3 磁小体膜蛋白交联反应条件的摸索 | 第89-94页 |
1.2.4 不同磁相应水平下菌株的MamXY四个蛋白的特点 | 第94-95页 |
1.3 小结与讨论 | 第95-96页 |
参考文献 | 第96-102页 |
致谢 | 第102页 |