| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 缩略语表 | 第9-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-18页 |
| 1 猪流行性腹泻病毒及其疫苗的研究 | 第13-15页 |
| 1.1 猪流行性腹泻的流行与危害 | 第13页 |
| 1.2 猪流行性腹泻病毒的研究 | 第13-14页 |
| 1.3 猪流行性腹泻病毒抗原表位的研究 | 第14页 |
| 1.4 猪流行性腹泻病毒疫苗的研究 | 第14-15页 |
| 2 枯草杆菌芽孢表面展示技术 | 第15-17页 |
| 2.1 枯草杆菌芽孢 | 第15-16页 |
| 2.2 枯草杆菌芽孢作为疫苗载体的研究 | 第16-17页 |
| 3 本研究的选题意义 | 第17-18页 |
| 第二章 构建表面展示PEDV S蛋白保护性抗原片段的枯草杆菌重组芽孢 | 第18-34页 |
| 1 材料 | 第18-20页 |
| 1.1 病毒 | 第18页 |
| 1.2 菌株及质粒 | 第18页 |
| 1.3 试剂及溶液 | 第18-19页 |
| 1.4 培养基 | 第19-20页 |
| 1.5 试验仪器 | 第20页 |
| 2 方法 | 第20-27页 |
| 2.1 目的片段的扩增 | 第20-22页 |
| 2.1.1 引物设计 | 第20-21页 |
| 2.1.2 基因组提取 | 第21页 |
| 2.1.3 PCR扩增目的片段 | 第21-22页 |
| 2.2 重组质粒pDG364-CotB-COE_1的构建 | 第22-24页 |
| 2.2.1 目的片段与T载体的连接 | 第22页 |
| 2.2.2 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第22页 |
| 2.2.3 连接产物的转化 | 第22-23页 |
| 2.2.4 重组质粒pDG364-CotB-COE_1的构建 | 第23-24页 |
| 2.3 重组枯草芽孢杆菌的构建 | 第24页 |
| 2.3.1 枯草芽孢杆菌感受态细胞的制备 | 第24页 |
| 2.3.2 重组质粒pDG364-CotB-COE1的转化 | 第24页 |
| 2.4 重组枯草芽孢杆菌的鉴定筛选 | 第24-25页 |
| 2.4.1 重组枯草芽孢杆菌的淀粉酶活性鉴定 | 第24页 |
| 2.4.2 重组枯草芽孢杆菌PCR及测序鉴定 | 第24-25页 |
| 2.5 枯草杆菌重组芽孢的鉴定与观察 | 第25-27页 |
| 2.5.1 枯草杆菌芽孢的制备 | 第25页 |
| 2.5.2 枯草芽孢杆菌芽孢的纯化 | 第25页 |
| 2.5.3 枯草杆菌重组芽孢衣壳总蛋白western-blot分析 | 第25-26页 |
| 2.5.4 枯草杆菌重组芽孢免疫显微镜观察 | 第26-27页 |
| 3. 试验结果 | 第27-32页 |
| 3.1 目的基因的扩增 | 第27-28页 |
| 3.2 重组质粒pDG364-CotB-COE1的鉴定 | 第28-29页 |
| 3.3 重组枯草芽孢杆菌淀粉酶活性鉴定 | 第29页 |
| 3.4 重组枯草芽孢杆菌PCR鉴定 | 第29-31页 |
| 3.5 重组芽孢Western-blot及免疫荧光显微镜分析 | 第31-32页 |
| 4 讨论 | 第32-34页 |
| 第三章 表面展示PEDV S蛋白抗原片段的枯草杆菌重组芽孢对小鼠免疫效果研究 | 第34-42页 |
| 1 材料 | 第34页 |
| 1.1 病毒与菌株 | 第34页 |
| 1.2 试剂与溶液 | 第34页 |
| 1.2.1 试剂 | 第34页 |
| 1.2.2 ELISA检测所需溶液的配制 | 第34页 |
| 1.3 培养基 | 第34页 |
| 2 方法 | 第34-37页 |
| 2.2 动物饲养管理 | 第34-35页 |
| 2.3 动物分组 | 第35页 |
| 2.4 样品的采集 | 第35页 |
| 2.5 血清IgG与肠内容物sIgA抗体水平间接ELISA检测 | 第35-36页 |
| 2.6 脾淋巴细胞增殖 | 第36-37页 |
| 2.6.1 小鼠淋巴细胞的制备 | 第36页 |
| 2.6.2 淋巴细胞增殖试验 | 第36-37页 |
| 2.7 淋巴细胞因子检测 | 第37页 |
| 2.8 数据统计 | 第37页 |
| 3. 结果 | 第37-40页 |
| 3.1 间接ELISA抗体水平检测 | 第37-38页 |
| 3.1.1 血清特异性IgG抗体水平检测结果 | 第37-38页 |
| 3.1.2 小鼠小肠内容物中特异性sIgA检测结果 | 第38页 |
| 3.2 淋巴细胞增殖试验 | 第38-39页 |
| 3.3 淋巴细胞因子测定结果 | 第39-40页 |
| 4. 讨论 | 第40-42页 |
| 第四章 重组枯草杆菌PBE芽孢对小鼠生长、盲肠菌群及免疫器官指数的影响 | 第42-50页 |
| 1 材料 | 第42页 |
| 1.1 试剂及仪器 | 第42页 |
| 1.2 培养基 | 第42页 |
| 2 方法 | 第42-44页 |
| 2.1 小鼠生长性能测定 | 第42-43页 |
| 2.2 小鼠盲肠菌群的活菌计数 | 第43页 |
| 2.2.1 盲肠内容物样品处理 | 第43页 |
| 2.2.2 培养与计数 | 第43页 |
| 2.3 PCR-DGGE检测小鼠盲肠菌群结构变化 | 第43-44页 |
| 2.3.1 细菌总DNA提取 | 第43页 |
| 2.3.2 基因组总DNA16S rDNA V3区扩增 | 第43页 |
| 2.3.3 扩增片段的变性梯度凝胶电泳 | 第43-44页 |
| 2.3.4 条带的回收及克隆测序 | 第44页 |
| 2.4 免疫器官指数检测 | 第44页 |
| 2.5 数据统计 | 第44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-48页 |
| 3.1 重组芽孢对小鼠增重的影响 | 第44-45页 |
| 3.2 小鼠盲肠菌群数量变化 | 第45页 |
| 3.3 小鼠肠道菌群PCR-DGGE指纹图谱 | 第45-46页 |
| 3.4 PCR-DGGE检测小鼠肠道菌群多样性 | 第46-47页 |
| 3.5 小鼠肠道特异性菌群和共性菌群分析 | 第47页 |
| 3.6 重组芽孢对小鼠免疫器官的影响 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-50页 |
| 第五章 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 附录 | 第58-63页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第63页 |
