| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 主要缩略词 | 第8-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-27页 |
| 1 病原学 | 第13-20页 |
| 1.1 PRV的结构特征 | 第13页 |
| 1.2 PRV的理化特性和培养特性 | 第13-14页 |
| 1.3 PRV分子生物学特性 | 第14-18页 |
| 1.3.1 PRV基因结构 | 第14-15页 |
| 1.3.2 非必需糖蛋白及功能 | 第15-17页 |
| 1.3.3 必需糖蛋白及功能 | 第17-18页 |
| 1.4 PRV的复制 | 第18-19页 |
| 1.5 PRV的致病机制 | 第19-20页 |
| 2 PRV的流行及诊断 | 第20-23页 |
| 2.1 PRV在全球范围的流行 | 第20页 |
| 2.2 PRV在我国的流行 | 第20-21页 |
| 2.3 临床症状及病理变化 | 第21-22页 |
| 2.4 PRV的检测 | 第22-23页 |
| 2.4.1 病毒的分离 | 第22页 |
| 2.4.2 血清学诊断 | 第22-23页 |
| 3 疫苗防治 | 第23-26页 |
| 3.1 弱毒疫苗 | 第23页 |
| 3.2 灭活苗 | 第23页 |
| 3.3 DNA疫苗 | 第23-24页 |
| 3.4 重组疫苗 | 第24页 |
| 3.5 亚单位疫苗 | 第24页 |
| 3.6 基因缺失苗 | 第24-25页 |
| 3.6.1 单基因缺失苗 | 第24-25页 |
| 3.6.2 双基因缺失苗 | 第25页 |
| 3.6.3 多基因缺失苗 | 第25页 |
| 3.7 gE/gI基因缺失在疫苗防治的应用前景 | 第25-26页 |
| 4 研究目的及意义 | 第26-27页 |
| 第二章 PRV野毒株的分离鉴定及部分生物学特性分析 | 第27-53页 |
| 1 材料 | 第27-29页 |
| 1.1 病料 | 第27页 |
| 1.2 细胞、主要试剂 | 第27-28页 |
| 1.3 阳性血清和试验小鼠 | 第28页 |
| 1.4 主要培养基及其配制 | 第28-29页 |
| 1.5 主要仪器 | 第29页 |
| 2 方法 | 第29-36页 |
| 2.1 用于检测的PCR引物 | 第29-30页 |
| 2.2 病毒核酸提取及PCR鉴定 | 第30-31页 |
| 2.3 病毒的分离 | 第31页 |
| 2.4 病毒的蚀斑纯化 | 第31页 |
| 2.5 外源病毒的检测 | 第31-32页 |
| 2.6 病毒TCID_(50)的测定 | 第32页 |
| 2.7 病毒的血清中和试验 | 第32页 |
| 2.8 小鼠LD_(50)的测定 | 第32-33页 |
| 2.9 PRV部分基因的分段扩增及序列分析 | 第33-36页 |
| 2.9.1 用于扩增PRV XJ株部分基因片段的引物设计 | 第33-34页 |
| 2.9.2 PRV XJ株DNA的分段扩增 | 第34页 |
| 2.9.3 克隆片段的胶回收 | 第34-35页 |
| 2.9.4 回收片段的连接转化 | 第35页 |
| 2.9.5 重组质粒的鉴定及扩大培养 | 第35-36页 |
| 2.9.6 扩增目的片段的基因测序与序列拼接 | 第36页 |
| 2.9.7 PRV-XJ株部分基因组的序列分析 | 第36页 |
| 3 结果 | 第36-50页 |
| 3.1 病料检测 | 第36-37页 |
| 3.2 PRV病毒的分离 | 第37-38页 |
| 3.3 病毒的空斑形态 | 第38页 |
| 3.4 外源病毒的检测结果 | 第38-39页 |
| 3.5 PRV-XJ株TCID_(50)的测定 | 第39-40页 |
| 3.6 PRV-XJ株的中和试验 | 第40页 |
| 3.7 小鼠感染试验 | 第40-41页 |
| 3.8 PRV-XJ株gE、gC、gD及gB基因扩增结果 | 第41-42页 |
| 3.9 阳性质粒的鉴定 | 第42页 |
| 3.10 PRV-XJ株gE基因核苷酸和氨基酸序列分析 | 第42-44页 |
| 3.10.1 gE基因核苷酸和氨基酸序列分析 | 第42页 |
| 3.10.2 gE基因氨基酸进化树分析 | 第42-44页 |
| 3.11 PRV-XJ株gC基因核苷酸和氨基酸序列分析 | 第44-46页 |
| 3.11.1 gC基因核苷酸和氨基酸序列分析 | 第44-45页 |
| 3.11.2 gC基因氨基酸进化树分析 | 第45-46页 |
| 3.12 PRV-XJ株gD基因核苷酸和氨基酸序列分析 | 第46-48页 |
| 3.12.1 gD基因核苷酸和氨基酸序列分析 | 第46-47页 |
| 3.12.2 gD基因氨基酸进化树分析 | 第47-48页 |
| 3.13 PRV-XJ株gB基因核苷酸和氨基酸序列分析 | 第48-50页 |
| 3.13.1 gB基因核苷酸和氨基酸序列分析 | 第48-49页 |
| 3.13.2 gB基因氨基酸进化树分析 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-52页 |
| 4.1 分离鉴定 | 第50页 |
| 4.2 序列分析 | 第50-52页 |
| 5 小结 | 第52-53页 |
| 第三章 PRV-gI/gE双基因缺失突变株的构建和免疫效力研究 | 第53-74页 |
| 1 材料 | 第53-54页 |
| 1.1 细胞、病毒、质粒和试剂 | 第53-54页 |
| 1.2 实验动物 | 第54页 |
| 1.3 主要仪器 | 第54页 |
| 2 方法 | 第54-62页 |
| 2.1 质粒DNA的小量制备及酶切鉴定 | 第54-55页 |
| 2.2 质粒的大量制备 | 第55-56页 |
| 2.3 PRV-XJ株病毒DNA的提取 | 第56页 |
| 2.4 转染细胞的准备 | 第56-57页 |
| 2.5 体外转染哺乳动物细胞脂质体转化法(LiPofection Reagent) | 第57-58页 |
| 2.6 基因缺失病毒rPRVXJ-de1gI/gE-EGFP的纯化 | 第58-59页 |
| 2.7 基因缺失病毒rPRVXJ-de1gI/gE-EGFP的PCR鉴定与IFA | 第59页 |
| 2.8 基因缺失病毒rPRVXJ-de1gI/gE-EGFP的一步生长曲线测定 | 第59-60页 |
| 2.9 免疫及攻毒 | 第60-61页 |
| 2.10 酶联免疫试验 | 第61-62页 |
| 2.11 免疫及攻毒后的排毒检测 | 第62页 |
| 2.12 数据处理 | 第62页 |
| 3 结果 | 第62-71页 |
| 3.1 质粒pPI-2.EGFP的鉴定 | 第62-64页 |
| 3.2 PRV的同源重组和rPRVXJ-de1gI/gE-EGFP的纯化 | 第64-65页 |
| 3.3 基因缺失病毒rPRVXJ-de1gI/gE-EGFP的鉴定 | 第65-67页 |
| 3.4 病毒生长曲线的测定 | 第67-68页 |
| 3.5 中和抗体水平检测 | 第68-69页 |
| 3.6 免疫及攻毒后临床变化 | 第69-70页 |
| 3.7 免疫及攻毒后排毒检测 | 第70-71页 |
| 4 讨论 | 第71-73页 |
| 5 小结 | 第73-74页 |
| 全文总结 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第80页 |
