| 中文摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-12页 |
| 英文缩略词表 | 第12-13页 |
| 前言 | 第13-14页 |
| 第一篇 文献综述 | 第14-28页 |
| 1 传统型布鲁氏菌病疫苗 | 第15-17页 |
| ·S19号弱毒活菌苗 | 第15-17页 |
| ·RB51疫苗株 | 第15页 |
| ·牛种布鲁氏菌株45/20 | 第15-16页 |
| ·羊种布鲁氏菌Rev.l弱毒活苗株 | 第16页 |
| ·羊种布鲁氏菌53H38疫苗株 | 第16页 |
| ·羊种布鲁氏菌5号弱毒活苗株 | 第16页 |
| ·S2号弱毒活苗株 | 第16-17页 |
| 2 新型布鲁氏菌疫苗的发展 | 第17-19页 |
| ·布鲁氏菌重组蛋白和DNA疫苗 | 第17-18页 |
| ·布鲁氏菌基因敲除疫苗 | 第18-19页 |
| 3 基于抗原表位的亚单位疫苗研究现状 | 第19-22页 |
| ·抗原表位的预测 | 第19-20页 |
| ·布鲁氏菌相关抗原表位研究现状 | 第20-21页 |
| ·其他抗原表位亚单位疫苗 | 第21-22页 |
| 4 展望 | 第22页 |
| 参考文献 | 第22-28页 |
| 第二篇 试验研究 | 第28-72页 |
| 第一章 羊种布鲁氏菌M5-90△bp261、M5-90△bp262的构建及稳定性检测 | 第28-45页 |
| 1 材料与方法 | 第29-35页 |
| ·材料 | 第29页 |
| ·方法 | 第29-35页 |
| 2 结果 | 第35-43页 |
| ·突变区域选择 | 第35页 |
| ·扩增bp261基因上游同源臂与下游同源臂 | 第35-36页 |
| ·扩增bp262基因上游同源臂与下游同源臂 | 第36-37页 |
| ·扩增sacB基因 | 第37页 |
| ·bp261基因上、下游同源臂融合 | 第37-38页 |
| ·bp262基因上、下游同源臂融合 | 第38页 |
| ·酶切鉴定重组质粒pMD18-bp261/bp262和pGEM-7Zf-bp261/bp262 | 第38-39页 |
| ·酶切鉴定同源重组自杀质粒pGEM-7Zf-bp261/bp262-sacB | 第39-40页 |
| ·一次重组菌的筛选 | 第40-41页 |
| ·二次重组菌的筛选 | 第41页 |
| ·基因突变株的遗传稳定性检测 | 第41-43页 |
| 3 讨论 | 第43-44页 |
| 4 小结 | 第44-45页 |
| 第二章 基因突变株免疫原性及毒力状况研究 | 第45-60页 |
| 1 材料与方法 | 第45-48页 |
| ·材料 | 第45-46页 |
| ·方法 | 第46-48页 |
| 2 结果 | 第48-57页 |
| ·试管凝集试验 | 第48-49页 |
| ·虎红平板凝集试验 | 第49页 |
| ·小鼠IgG抗体水平检测 | 第49-50页 |
| ·细胞因子检测 | 第50页 |
| ·小鼠外周血T淋巴细胞亚群分类 | 第50-54页 |
| ·脾脏指数法测定细菌毒力 | 第54-56页 |
| ·攻毒保护力的初步评价 | 第56-57页 |
| 3 讨论 | 第57-59页 |
| 4 小结 | 第59-60页 |
| 第三章 原核表达载体pET-32a-BP261,pET-32a-BP262的构建与表达 | 第60-69页 |
| 1 材料与方法 | 第60-64页 |
| ·材料 | 第60-61页 |
| ·方法 | 第61-64页 |
| 2 结果 | 第64-68页 |
| ·目的基因的克隆 | 第64-65页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第65页 |
| ·BP261和BP262蛋白的表达 | 第65-66页 |
| ·BP261和BP262蛋白的纯化 | 第66-67页 |
| ·Western Blot验证蛋白的免疫原性 | 第67-68页 |
| ·Western Blot验证小鼠免疫血清特异性抗体 | 第68页 |
| 3 讨论 | 第68-69页 |
| 4 小结 | 第69页 |
| 参考文献 | 第69-72页 |
| 第三篇 试验结论 | 第72-73页 |
| 附录 | 第73-77页 |
| 1. 基因突变株M5-90△bp261测序结果 | 第73-74页 |
| 2. 基因突变株M5-90△bp262测序结果 | 第74-75页 |
| 3. 原核表达BP261测序结果 | 第75-76页 |
| 4. 原核表达BP262测序结果 | 第76-77页 |
| 附录二 | 第77-80页 |
| 1. PGEM-7Zf~+载体图谱 | 第77-78页 |
| 2. pET-32a载体图谱 | 第78-79页 |
| 3. pGB262同源重组自杀载体构建图谱 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 作者简介 | 第81-82页 |
| 导师评阅表 | 第82页 |
