| 英文缩略词表 | 第1-10页 |
| 中文摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 前言 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述布鲁氏菌致病机制的研究进展 | 第13-19页 |
| 1. 布鲁氏菌的病原学研究 | 第13-15页 |
| 2. 布鲁氏菌毒力相关因子 | 第15-17页 |
| ·LPS | 第15页 |
| ·OMP | 第15-16页 |
| ·应激反应蛋白 | 第16页 |
| ·BvrR/BvrS | 第16页 |
| ·Ⅳ型分泌系统(T4SS) | 第16-17页 |
| 3. 布鲁氏菌的胞内寄生机制 | 第17-18页 |
| ·布鲁氏菌侵袭的靶细胞 | 第17页 |
| ·布鲁氏菌胞内运输及复制 | 第17-18页 |
| 4 布鲁氏菌病感染与免疫 | 第18-19页 |
| ·天然免疫 | 第18页 |
| ·获得性免疫 | 第18-19页 |
| 第二章 布鲁氏菌外膜蛋白Omp25的原核表达、纯化及免疫原性鉴定 | 第19-28页 |
| 1 材料与方法 | 第19-24页 |
| ·菌株与质粒 | 第19页 |
| ·主要试剂 | 第19-20页 |
| ·主要仪器 | 第20页 |
| ·实验方法 | 第20-24页 |
| 2 结果 | 第24-26页 |
| ·omp25目的基因的PCR扩增 | 第24页 |
| ·pMD18-omp25克隆载体的构建及鉴定 | 第24页 |
| ·重组表达质粒pET32a-omp25的鉴定 | 第24-25页 |
| ·Omp25蛋白在大肠杆菌中的诱导表达表达 | 第25页 |
| ·Omp25蛋白的纯化和Western_blotting分析 | 第25-26页 |
| 3 讨论 | 第26-27页 |
| ·外膜蛋白的重要性 | 第26页 |
| ·关于omp25基因 | 第26页 |
| ·Omp25蛋白表达问题 | 第26-27页 |
| 4 结论 | 第27-28页 |
| 第三章 布鲁氏菌外膜蛋omp25的真核表达及干扰片段的筛选 | 第28-40页 |
| 1 材料与方法 | 第28-35页 |
| ·菌株、质粒和细胞 | 第28页 |
| ·主要试剂 | 第28-29页 |
| ·主要仪器 | 第29页 |
| ·方法 | 第29-35页 |
| 2 结果 | 第35-38页 |
| ·omp25基因的PCR扩增 | 第35页 |
| ·pEGFP-omp25真核表达载体的构建及鉴定 | 第35页 |
| ·pEGFP-omp25质粒转染HPT-8细胞 | 第35-36页 |
| ·Western blot鉴定Omp25蛋白表达 | 第36页 |
| ·siRNA干扰载体的构建 | 第36页 |
| ·siRNA干扰载体转染HPT-8细胞 | 第36-37页 |
| ·实时定量PCR目的片段的克隆 | 第37页 |
| ·荧光定量PCR标准曲线制作 | 第37-38页 |
| ·omp25基因的干扰效果检测 | 第38页 |
| 3 讨论 | 第38-39页 |
| ·研究omp25基因与流产关系的意义 | 第38-39页 |
| ·RNA干扰的探讨 | 第39页 |
| 4 结论 | 第39-40页 |
| 第四章 Omp25蛋白对胚胎滋养层细胞功能的影响 | 第40-51页 |
| 1 材料与方法 | 第40-43页 |
| ·细胞、蛋白和质粒 | 第40页 |
| ·主要试剂 | 第40-41页 |
| ·主要仪器 | 第41页 |
| ·方法 | 第41-43页 |
| ·Bradford法测定Omp25蛋白浓度 | 第41页 |
| ·细胞培养 | 第41页 |
| ·Omp25蛋白对HPT-8细胞培养上清液NO、LDH、TNF-α水平的影响 | 第41-42页 |
| ·质粒pEGFP-omp25与siRNA-c共转染 | 第42页 |
| ·检测NO、TNF-a水平 | 第42页 |
| ·实时定量PCR检测TLR4和MyD88mRNA的表达变化 | 第42-43页 |
| 2 结果 | 第43-48页 |
| ·NO、LDH和TNF-a标准曲线的制作 | 第43页 |
| ·低剂量Omp25对HPT-8细胞上清液NO和LDH活力的影响 | 第43-44页 |
| ·高剂量Omp25对HPT-8细胞上清液NO和LDH活力的影响 | 第44-45页 |
| ·siRNA-c对HPT-8细胞N0、TNF-α释放量的影响 | 第45-46页 |
| ·实时定量PCR检测TLR4、MyD88 mRNA的变化 | 第46-47页 |
| ·siRNA-c对转染的HPT-8细胞TLR-4水平的影响 | 第47-48页 |
| 3 讨论 | 第48-50页 |
| ·布鲁氏菌感染与宿主细胞受体的关系 | 第48页 |
| ·Toll受体与布鲁氏菌感染 | 第48-50页 |
| 4 结论 | 第50-51页 |
| 全文总结 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 作者简介 | 第60-61页 |
| 导师评阅表 | 第61页 |
