| 中文摘要 | 第1-14页 |
| Abstract | 第14-18页 |
| 1 前言 | 第18-35页 |
| ·水稻条纹病毒的研究进展 | 第18-23页 |
| ·水稻条纹叶枯病 | 第18页 |
| ·水稻条纹病毒 | 第18-21页 |
| ·水稻条纹病毒的基因组转录及复制 | 第21页 |
| ·水稻条纹病毒传的传毒介体及传毒机制 | 第21-23页 |
| ·水稻黑条矮缩病毒的研究进展 | 第23-27页 |
| ·水稻黑条矮缩病 | 第23-24页 |
| ·水稻黑条矮缩病毒 | 第24-25页 |
| ·水稻黑条矮缩病毒的基因组转录及复制 | 第25-26页 |
| ·水稻黑条矮缩病毒的传毒介体及传毒机制 | 第26-27页 |
| ·水稻病毒病的防治 | 第27-28页 |
| ·通过化学防治来控制病害 | 第27页 |
| ·运用品种抗性来控制病害 | 第27-28页 |
| ·基因工程技术来控制病害 | 第28页 |
| ·RNA沉默 | 第28-31页 |
| ·小干扰RNA | 第29-30页 |
| ·微小RNA | 第30-31页 |
| ·RNA沉默与植物病毒抗性 | 第31-32页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第32-35页 |
| 2 材料与方法 | 第35-62页 |
| ·材料 | 第35-37页 |
| ·毒源 | 第35页 |
| ·供试植物、昆虫 | 第35页 |
| ·菌株和质粒 | 第35页 |
| ·序列测定 | 第35页 |
| ·常用化学试剂与分子生物学试剂 | 第35-36页 |
| ·引物设计 | 第36-37页 |
| ·方法 | 第37-62页 |
| ·osa-miR528的克隆 | 第37-41页 |
| ·水稻总DNA的提取 | 第37-38页 |
| ·osa-miR528的PCR扩增 | 第38页 |
| ·DNA片段的回收 | 第38-39页 |
| ·目的基因DNA片段与pMD18-T载体的连接 | 第39页 |
| ·感受态细胞制备 | 第39页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第39-40页 |
| ·转化菌落PCR鉴定 | 第40页 |
| ·质粒DNA的小量提取 | 第40-41页 |
| ·amiRNA的筛选 | 第41页 |
| ·amiRNA植物表达载体的构建 | 第41-44页 |
| ·amiRNA植物表达载体的构建策略 | 第41-42页 |
| ·pre-miR528改造为pre-amiR-RSV和pre-amiR-RBSDV | 第42页 |
| ·质粒DNA的酶切 | 第42-43页 |
| ·目的片段与质粒DNA的连接 | 第43页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第43-44页 |
| ·农杆菌介导的瞬时表达 | 第44页 |
| ·Northern杂交分析 | 第44-48页 |
| ·植株总RNA的提取 | 第44-45页 |
| ·总RNA的甲醛凝胶电泳 | 第45页 |
| ·总RNA的转膜 | 第45-46页 |
| ·探针制备 | 第46页 |
| ·DIG标记有效性检测 | 第46-47页 |
| ·预杂交与杂交 | 第47-48页 |
| ·洗膜与显影 | 第48页 |
| ·植株siRNA/miRNA的Northern blot分析 | 第48-50页 |
| ·植株siRNA/miRNA的提取 | 第48-49页 |
| ·sRNA聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第49页 |
| ·sRNA转膜 | 第49-50页 |
| ·miRNA探针的制备 | 第50页 |
| ·miRNA杂交 | 第50页 |
| ·5'-RLM-RACE验证miRNA靶基因的剪切位点 | 第50-52页 |
| ·农杆菌介导的水稻转化及转基因植株的获得 | 第52-54页 |
| ·预培养 | 第52-53页 |
| ·农杆菌侵染和共培养 | 第53页 |
| ·转化植株的获得 | 第53页 |
| ·再生植株的PPT抗性检测 | 第53页 |
| ·再生植株总DNA的小量提取 | 第53-54页 |
| ·再生植株的PCR检测 | 第54页 |
| ·转基因水稻植株的抗病性鉴定 | 第54页 |
| ·转基因植株的ELISA检测 | 第54-55页 |
| ·转基因植株的Southern blot分析 | 第55-58页 |
| ·水稻总DNA的提取 | 第55页 |
| ·转基因植株总DNA的酶切 | 第55页 |
| ·DNA凝胶电泳 | 第55-56页 |
| ·DNA转膜 | 第56页 |
| ·探针标记 | 第56-57页 |
| ·DIG标记有效性的检测 | 第57页 |
| ·预杂交与杂交 | 第57-58页 |
| ·洗膜与显影 | 第58页 |
| ·转基因植株的遗传稳定性分析 | 第58页 |
| ·amiRNA二级结构的预测 | 第58-59页 |
| ·灰飞虱NCuP基因的克隆 | 第59页 |
| ·qRT-PCR检测灰飞虱体内目的基因的表达量 | 第59页 |
| ·灰飞虱的饲毒实验 | 第59页 |
| ·检测灰飞虱的带毒率 | 第59-60页 |
| ·体外转录合成NCuP的dsRNA | 第60页 |
| ·dsRNA饲喂灰飞虱 | 第60-61页 |
| ·灰飞虱的获毒试验 | 第61页 |
| ·灰飞虱的传毒试验 | 第61-62页 |
| 3 结果与分析 | 第62-85页 |
| ·基于amiRNA策略培育双抗RSV和RBSDV转基因水稻新材料 | 第62-79页 |
| ·水稻osa-miR528的扩增 | 第62-63页 |
| ·amiRNA的筛选及引物设计 | 第63页 |
| ·pre-miRNA的改造 | 第63-66页 |
| ·靶向于RSV CP基因不同区段的人工miRNA前体的构建 | 第63-64页 |
| ·靶向于RBSDV CP基因不同区段的人工miRNA前体的构建 | 第64-65页 |
| ·双抗植物表达载体的构建 | 第65-66页 |
| ·农杆菌介导的瞬时侵染检测amiRNA表达载体的有效性 | 第66页 |
| ·Northern blot检测靶RNA的积累 | 第66-67页 |
| ·5'-RLM-RACE验证miRNA靶基因的剪切位点 | 第67-68页 |
| ·T_0代转基因再生植株的获得及检测 | 第68-70页 |
| ·转基因植株的amiRNA的表达检测 | 第70页 |
| ·T_2代转基因植株的抗性鉴定 | 第70-72页 |
| ·T_2代转基因植株的Northern杂交分析 | 第72-73页 |
| ·T_2代转基因植株的amiRNA杂交分析 | 第73页 |
| ·T_2代转基因植株的siRNA杂交分析 | 第73-74页 |
| ·转基因植株的Southern blot分析 | 第74-75页 |
| ·转基因和病毒抗性的遗传稳定性分析 | 第75-77页 |
| ·amiRNA二级结构的预测 | 第77-79页 |
| ·介体传毒相关蛋白的鉴定及沉默传毒相关蛋白对介体传毒的影响 | 第79-85页 |
| ·灰飞虱NCuP基因的克隆 | 第79-80页 |
| ·NCuP基因在灰飞虱不同发育时期的表达特性 | 第80-81页 |
| ·RSV的侵染对不同龄期灰飞虱NCuP基因表达的影响 | 第81页 |
| ·体外转录合成dsNCuP | 第81-82页 |
| ·dsNCuP干扰灰飞虱体内的RSV表达 | 第82-83页 |
| ·饲喂dsNCuP对灰飞虱获毒效率的影响 | 第83-84页 |
| ·饲喂dsNCuP对灰飞虱传毒效率的影响 | 第84-85页 |
| 4 讨论 | 第85-89页 |
| ·靶向RSV和RBSDV CP基因不同区段的ami RNA介导了对两种病毒的抗病性 | 第85-87页 |
| ·沉默灰飞虱体内与RSV互作的基因影响灰飞虱对RSV的传播 | 第87-89页 |
| 5 结论 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-107页 |
| 致谢 | 第107-108页 |
| 攻读学位期间发表的论文及成果 | 第108页 |
