| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 1 前言 | 第12-17页 |
| ·肿瘤坏死因子 | 第12页 |
| ·肿瘤坏死因子受体 | 第12-13页 |
| ·治疗类风湿性关节炎的药物 | 第13-16页 |
| ·非甾体抗炎药 | 第13-14页 |
| ·慢作用抗风湿药 | 第14页 |
| ·生物药物 | 第14-16页 |
| ·药物分子设计与优化的研究进展 | 第16页 |
| ·本论文的研究意义 | 第16-17页 |
| 2 重组 sTNF -RI 蛋白同义密码突变库的构建与筛选 | 第17-31页 |
| ·引言 | 第17-18页 |
| ·实验试剂及材料 | 第18-19页 |
| ·质粒与细胞株 | 第18页 |
| ·主要试剂与耗材 | 第18页 |
| ·试剂配制 | 第18-19页 |
| ·主要实验仪器 | 第19页 |
| ·实验方法 | 第19-24页 |
| ·同义密码突变库模板 | 第19-20页 |
| ·同义密码突变库引物设计 | 第20-21页 |
| ·同义密码突变库的构建 | 第21-22页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第22页 |
| ·重组表达质粒的电击转化 | 第22-23页 |
| ·菌落 PCR 检测阳性单克隆 | 第23页 |
| ·阳性菌的诱导表达 | 第23页 |
| ·目标蛋白的 dot blot 分析 | 第23-24页 |
| ·同义突变菌的小试培养验证 | 第24页 |
| ·放大培养及蛋白产量验证 | 第24页 |
| ·结果与分析 | 第24-30页 |
| ·载体的准备 | 第24-25页 |
| ·同义密码突变库的装配 | 第25-26页 |
| ·同义密码突变库测序及库容计算 | 第26页 |
| ·同义密码突变库的酶切 | 第26-27页 |
| ·克隆菌落 PCR 鉴定 | 第27-28页 |
| ·Dot blotting 分析目标蛋白的表达结果 | 第28页 |
| ·同义突变菌株的测序结果 | 第28-29页 |
| ·克隆菌表达的小试验证 | 第29-30页 |
| ·蛋白产量的放大验证 | 第30页 |
| ·小结与讨论 | 第30-31页 |
| 3 蛋白可溶性表达分子结构优化 | 第31-58页 |
| ·引言 | 第31-33页 |
| ·实验试剂及材料 | 第33-36页 |
| ·载体与细胞株 | 第33-34页 |
| ·主要试剂 | 第34-35页 |
| ·试剂配制 | 第35-36页 |
| ·主要实验仪器 | 第36页 |
| ·方法 | 第36-44页 |
| ·引物设计 | 第36-37页 |
| ·Sop55-2.0 基因序列的扩增 | 第37页 |
| ·Sop55-2.0 基因与载体的酶切与回收 | 第37-38页 |
| ·基因的连接与转化 | 第38-39页 |
| ·克隆菌落 PCR 鉴定 | 第39页 |
| ·阳性克隆菌的表达及样品准备 | 第39-40页 |
| ·Western Blot 检测 | 第40页 |
| ·蛋白样品纯化 | 第40-41页 |
| ·ELISA 检测亲和力活性 | 第41-42页 |
| ·CHO 细胞表达结构形式的构建 | 第42页 |
| ·基于 L929 细胞的的生物活性检测 | 第42-43页 |
| ·融合标签及氨基酸突变优化 Sop55-2.6 蛋白可溶性表达 | 第43-44页 |
| ·结果与分析 | 第44-57页 |
| ·原核表达载体及 Sop55-2.0 分子基因的准备 | 第44-45页 |
| ·克隆菌的菌落 PCR 验证 | 第45-46页 |
| ·WB 检测结果 | 第46-48页 |
| ·Sop55-2.0 蛋白纯化及检测 | 第48-50页 |
| ·ELISA 亲和力检测 | 第50-52页 |
| ·CHO 表达蛋白与原蛋白电泳结果对比 | 第52-54页 |
| ·生物活性测定结果 | 第54-55页 |
| ·融合标签及氨基酸突变优化结果 | 第55-57页 |
| ·小结与讨论 | 第57-58页 |
| 4 结论与展望 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
| 作者在读期间科研成果简介 | 第65-66页 |
| 综述：氨基酸同义密码子研究进展 | 第66-72页 |
| 参考文献 | 第70-72页 |
