| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 1 引言 | 第10-13页 |
| ·人源化抗体 | 第10-11页 |
| ·人源化抗体研究背景 | 第10页 |
| ·人源化技术研究进展 | 第10-11页 |
| ·HER3 靶标简介 | 第11-12页 |
| ·单链抗体发展现况 | 第12-13页 |
| ·改良的 TA 克隆技术简介 | 第13页 |
| 2 抗 HER3 人源化单链抗体基因库构建 | 第13-37页 |
| ·前言 | 第13-14页 |
| ·实验材料 | 第14-17页 |
| ·实验仪器 | 第14页 |
| ·主要试剂 | 第14-15页 |
| ·引物设计及合成 | 第15-16页 |
| ·溶液配置 | 第16-17页 |
| ·实验方法 | 第17-32页 |
| ·HER3 抗原免疫小鼠及效价检测 | 第18-19页 |
| ·鼠源 cDNA 的制备 | 第19-21页 |
| ·淋巴细胞的分离 | 第19-20页 |
| ·鼠总细胞 RNA 的提取 | 第20-21页 |
| ·鼠 cDNA 的合成 | 第21页 |
| ·抗 HER3 人源化抗体基因库的建立 | 第21-24页 |
| ·鼠源 VH-CDR3 基因库制备 | 第21-22页 |
| ·人源 scFv 抗体框架区基因模板制备 | 第22-23页 |
| ·人源化抗 HER3 抗体基因库制备 | 第23-24页 |
| ·核糖体展示筛选人源抗体基因库 | 第24-27页 |
| ·表达型人源化单链抗体基因库制备 | 第27-29页 |
| ·基因库 N-末端表达调控序列 RTST7 domain 制备 | 第27页 |
| ·基因库 C-末端带 His 标签的 TA terminal 序列 | 第27-28页 |
| ·第三轮展示回收的 PCR 产物添加 TA 接头 | 第28页 |
| ·具有表达功能的 anti-HER3 scFv 基因库构建 | 第28-29页 |
| ·人源化抗 HER3 单链抗体库鉴定 | 第29-32页 |
| ·目标基因库测序 | 第29-31页 |
| ·酶切鉴定目的基因片段插入 | 第31页 |
| ·蛋白表达水平检测基因库的质量 | 第31-32页 |
| ·实验结果 | 第32-37页 |
| ·HER3 蛋白免疫小鼠效价检测 | 第32-33页 |
| ·总 RNA 提取结果 | 第33页 |
| ·抗 HER3 人源化抗体基因库的构建 | 第33-34页 |
| ·核糖体展示富集目的基因序列 | 第34页 |
| ·表达型人源化单链抗体基因库构建 | 第34-35页 |
| ·抗 HER3 人源化单链抗体基因库鉴定和初表达 | 第35-37页 |
| ·基因库库容估算 | 第35页 |
| ·酶切检测 | 第35-36页 |
| ·基因库测序检测 | 第36页 |
| ·目标抗体的表达鉴定 | 第36-37页 |
| ·小结 | 第37页 |
| 3 抗 HER3 人源化 SCFV 抗体筛选及亲和常数测定 | 第37-49页 |
| ·前言 | 第37-38页 |
| ·实验材料 | 第38-41页 |
| ·实验仪器 | 第38页 |
| ·主要试剂 | 第38页 |
| ·溶液配置 | 第38-41页 |
| ·实验方法 | 第41-44页 |
| ·菌落 PCR 对阳性克隆进行鉴定 | 第41页 |
| ·阳性菌抗体可溶性表达 | 第41-42页 |
| ·HER3 抗原和抗 VH3-VΚ1 兔多抗筛选目标抗体 | 第42页 |
| ·高活性菌株测序验证 | 第42-43页 |
| ·抗 HER3 scFv 的初步纯化 | 第43-44页 |
| ·间接 ELISA 鉴定纯化样品抗原结合活性 | 第44页 |
| ·筛选的高亲和力抗 HER3 scFv 亲和常数测定 | 第44页 |
| ·实验结果 | 第44-48页 |
| ·菌落 PCR 检测阳性克隆 | 第44-45页 |
| ·HER3 抗原和兔多抗筛选结果 | 第45页 |
| ·测序验证 | 第45-46页 |
| ·样品纯化结果检测 | 第46-47页 |
| ·间接 ELISA 鉴定纯化样品结合活性 | 第47-48页 |
| ·抗 HER3-236 scFv 抗体亲和常数测定 | 第48页 |
| ·小结 | 第48-49页 |
| 4.讨论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-53页 |
| 致谢 | 第53页 |
| 作者在读期间科研成果简介 | 第53-54页 |
| 综述：人源抗体的研究进展 | 第54-67页 |
| 参考文献 | 第64-67页 |
