| 致谢 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 目录 | 第10-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-34页 |
| ·体外酶法制备生物肝素 | 第13-17页 |
| ·肝素简介 | 第13-14页 |
| ·体外酶催化制备超低分子肝素 | 第14-15页 |
| ·UDP-GlcAc与PAPS的应用价值 | 第15-16页 |
| ·体外酶法合成UDP-GlcAc的途径 | 第16-17页 |
| ·酶法再生PAPS | 第17页 |
| ·尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶 | 第17-22页 |
| ·研究背景 | 第17-18页 |
| ·大肠杆菌来源UGPase | 第18-22页 |
| ·UGPase的研究意义 | 第22页 |
| ·尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶 | 第22-28页 |
| ·研究背景 | 第22-23页 |
| ·不同来源UGD | 第23-27页 |
| ·大肠杆菌来源UGD | 第27-28页 |
| ·UGD的研究意义 | 第28页 |
| ·芳基硫磺基转移酶 | 第28-32页 |
| ·研究背景 | 第28-29页 |
| ·鼠源ASTIV | 第29-31页 |
| ·ASTIV的研究意义 | 第31-32页 |
| ·大肠杆菌重组表达系统 | 第32页 |
| ·本课题的基本思路和研究内容 | 第32-34页 |
| 第二章 材料与方法 | 第34-48页 |
| ·质粒与菌株 | 第34页 |
| ·工具酶与主要试剂 | 第34页 |
| ·主要仪器 | 第34-36页 |
| ·分子生物学相关操作 | 第36-48页 |
| ·构建含目的基因的重组大肠杆菌 | 第36-38页 |
| ·目标蛋白在大肠杆菌中诱导表达、检测分析及分离纯化 | 第38-40页 |
| ·纯化蛋白的酶活测定 | 第40-46页 |
| ·HPCL-MS检测酶催化产物 | 第46页 |
| ·重组蛋白的酶学性质研究 | 第46-47页 |
| ·体外酶催化反应研究 | 第47-48页 |
| 第三章 UGPase在大肠杆菌中的重组表达、分离纯化及性质表征 | 第48-70页 |
| ·引言 | 第48页 |
| ·实验材料 | 第48-49页 |
| ·载体、菌株与培养基 | 第48-49页 |
| ·主要用酶 | 第49页 |
| ·实验方法 | 第49-52页 |
| ·引物设计 | 第49页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第49页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第49-50页 |
| ·表达重组蛋白 | 第50-51页 |
| ·目标蛋白分离纯化 | 第51页 |
| ·纯化蛋白的检测分析和保存 | 第51页 |
| ·纯化蛋白的酶活检测 | 第51页 |
| ·重组蛋白的酶学性质研究 | 第51-52页 |
| ·HPLC-MS检测酶催化反应混合物 | 第52页 |
| ·高底物浓度酶催化反应 | 第52页 |
| ·结果与分析 | 第52-68页 |
| ·UGPase编码基因的克隆 | 第52-53页 |
| ·pET-28a(+)-galU表达载体的构建 | 第53-54页 |
| ·UGPase的诱导表达 | 第54-55页 |
| ·重组UGPase蛋白纯化 | 第55-56页 |
| ·重组UGPase的性质表征 | 第56-63页 |
| ·UGPase诱导表达的条件优化 | 第63-67页 |
| ·高底物浓度酶催化反应 | 第67-68页 |
| ·本章总结 | 第68-70页 |
| 第四章 UGD在大肠杆菌中的重组表达、分离纯化及性质表征 | 第70-89页 |
| ·引言 | 第70页 |
| ·实验材料 | 第70-71页 |
| ·载体、菌株与培养基 | 第70页 |
| ·主要用酶 | 第70-71页 |
| ·实验方法 | 第71-73页 |
| ·引物设计 | 第71页 |
| ·目的基因的克隆 | 第71页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第71-72页 |
| ·表达重组蛋白 | 第72页 |
| ·目标蛋白分离纯化 | 第72页 |
| ·纯化蛋白的检测分析和保存 | 第72页 |
| ·纯化蛋白的酶活检测 | 第72-73页 |
| ·重组蛋白的酶学性质研究 | 第73页 |
| ·HPLC-MS检测酶催化反应混合物 | 第73页 |
| ·结果与分析 | 第73-88页 |
| ·UGD编码基因的克隆 | 第73-74页 |
| ·pET-28a(+)-ugd表达载体的构建 | 第74-75页 |
| ·UGD的诱导表达 | 第75-76页 |
| ·重组UGD蛋白纯化 | 第76页 |
| ·重组UGD的性质表征 | 第76-83页 |
| ·UGD诱导表达的条件优化 | 第83-87页 |
| ·高底物浓度催化反应 | 第87-88页 |
| ·本章总结 | 第88-89页 |
| 第五章 ASTIV在大肠杆菌中的重组表达与分离纯化 | 第89-99页 |
| ·引言 | 第89页 |
| ·实验材料 | 第89-90页 |
| ·载体、菌株与培养基 | 第89页 |
| ·主要用酶 | 第89-90页 |
| ·实验方法 | 第90-92页 |
| ·目的基因全合成 | 第90页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第90-91页 |
| ·表达重组蛋白 | 第91页 |
| ·目标蛋白分离纯化 | 第91页 |
| ·纯化蛋白的检测分析和保存 | 第91页 |
| ·纯化蛋白的酶活检测 | 第91-92页 |
| ·重组酶构型转变 | 第92页 |
| ·结果与分析 | 第92-98页 |
| ·pET-28a(+)-srat astIV载体的构建 | 第92页 |
| ·ASTIV的诱导表达 | 第92-93页 |
| ·重组ASTIV的纯化 | 第93-94页 |
| ·重组ASTIV的性质表征 | 第94-95页 |
| ·ASTIV诱导表达条件的优化 | 第95-98页 |
| ·本章总结 | 第98-99页 |
| 第六章 结论与展望 | 第99-102页 |
| ·课题内容总结 | 第99页 |
| ·课题结论 | 第99-100页 |
| ·课题展望 | 第100-102页 |
| 参考文献 | 第102-111页 |
| 作者简历 | 第111页 |
| 教育背景 | 第111页 |
| 攻读硕士学位论文期间研究成果 | 第111页 |
