| 致谢 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-16页 |
| ·孤啡肽基因概述 | 第9-10页 |
| ·孤啡肽基因的发现 | 第9页 |
| ·孤啡肽的分子结构 | 第9页 |
| ·孤啡肽的分布 | 第9-10页 |
| ·孤啡肽与受体的结合特征 | 第10页 |
| ·孤啡肽受体 | 第10页 |
| ·孤啡肽的生物学功能 | 第10-14页 |
| ·孤啡肽与摄食及能量代谢的关系 | 第10-11页 |
| ·营养调控 | 第11页 |
| ·外源性 N/OFQ 对动物摄食的影响 | 第11页 |
| ·能量相互作用平衡途径 | 第11-12页 |
| ·孤啡肽的其他生物学功能 | 第12-14页 |
| ·孤啡肽及其受体与其他激素的相互作用关系 | 第14页 |
| ·展望 | 第14-16页 |
| 2 引言 | 第16-17页 |
| 3 材料与方法 | 第17-33页 |
| ·小鼠 N/OFQ 基因的克隆、序列分析与结构预测 | 第17-26页 |
| ·试验动物 | 第17页 |
| ·菌种与载体 | 第17页 |
| ·样品的采集 | 第17-18页 |
| ·主要仪器 | 第18页 |
| ·主要试剂 | 第18-19页 |
| ·试验常规试剂 | 第19-22页 |
| ·小鼠 N/OFQ 基因的克隆 | 第22-25页 |
| ·DNA 序列分析及蛋白结构预测 | 第25-26页 |
| ·小鼠 pET28α-N/OFQ 原核表达载体的构建 | 第26-30页 |
| ·重组表达质粒 pET28α-N/OFQ 的构建路线图 | 第26页 |
| ·目的基因质粒的获取 | 第26-28页 |
| ·原核表达载体 pET-28a (+)质粒的获取 | 第28页 |
| ·目的片断与表达载体 pET-28α（+）的酶切回收 | 第28-29页 |
| ·目的片段与表达载体的连接 | 第29页 |
| ·重组质粒的转化和筛选 | 第29页 |
| ·重组质粒 pET28a-N/OFQ 的鉴定 | 第29-30页 |
| ·小鼠 N/OFQ 基因在大肠杆菌中的表达 | 第30-31页 |
| ·重组质粒 pET-28α-N/OFQ 的表达鉴定 | 第30-31页 |
| ·重组质粒在原核细胞中的诱导表达 | 第31页 |
| ·融合表达产物的可溶性鉴定 | 第31页 |
| ·小鼠 N/OFQ 蛋白的纯化与 Western blot 鉴定 | 第31-33页 |
| ·重组蛋白 N/OFQ 的纯化 | 第31-32页 |
| ·Western blot 鉴定 | 第32-33页 |
| 4 结果与分析 | 第33-45页 |
| ·鼠 N/OFQ 基因克隆 | 第33-38页 |
| ·鼠 N/OFQ 基因的 RT-PCR 扩增 | 第33-35页 |
| ·鼠 N/OFQ 克隆序列分析 | 第35-36页 |
| ·核苷酸序列同源性分析 | 第36-37页 |
| ·氨基酸序列同源性分析 | 第37-38页 |
| ·N/OFQ 基因的系统进化分析 | 第38页 |
| ·.鼠 pET-28-N/OFQ 原核表达载体的构建 | 第38-43页 |
| ·N/OFQ 基因 PCR 扩增图（含酶切位点） | 第38-39页 |
| ·带酶切位点基因 N/OFQ 菌液 PCR 电泳鉴定图 | 第39页 |
| ·质粒 pMD19-N/OFQ 和 pET-28 双酶切产物电泳图 | 第39-40页 |
| ·pET-28-N/OFQ 菌液 PCR 产物电泳结果 | 第40-41页 |
| ·重组质粒 pET-28-N/OFQ 双酶切鉴定结果 | 第41页 |
| ·重组质粒的测序鉴定 | 第41-43页 |
| ·小鼠 N/OFQ 基因在大肠杆菌中的表达 | 第43-44页 |
| ·N/OFQ 蛋白的纯化及 Western blot 鉴定 | 第44-45页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第44-45页 |
| ·Western blot 鉴定 | 第45页 |
| 5 讨论 | 第45-46页 |
| 6 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-51页 |
| 英文摘要 | 第51-53页 |
| 附录：在研究生学习工作期间参与的其他科研工作 | 第53页 |
