| 致谢 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| 文献综述 | 第9-19页 |
| 猪细小病毒 | 第9页 |
| 1 病原学 | 第9-14页 |
| ·PPV 分类地位 | 第9页 |
| ·PPV 的生物物理及生物化学 | 第9-10页 |
| ·PPV 基因组结构及病毒的复制 | 第10-11页 |
| ·PPV 的转录 | 第11-12页 |
| ·PPV 编码的蛋白 | 第12-13页 |
| ·PPV 分型 | 第13-14页 |
| ·血凝性 | 第14页 |
| 2 流行病学 | 第14页 |
| 3 临床症状及病理变化 | 第14-15页 |
| 4 诊断 | 第15-16页 |
| ·病毒的分离 | 第15页 |
| ·血清学检测方法 | 第15-16页 |
| ·血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验 | 第15页 |
| ·血清中和试验(SN) | 第15-16页 |
| ·ELISA 试验 | 第16页 |
| ·乳胶凝集试验(1atex agglutination test，LAT) | 第16页 |
| ·PCR 检测 PPV | 第16页 |
| ·LAMP 诊断 PPV | 第16页 |
| 5 PPV 的防治 | 第16-18页 |
| ·PPV 目前并没有有效的治疗办法，主要的综合防治措施： | 第16-17页 |
| ·PPV 疫苗 | 第17-18页 |
| ·弱毒疫苗 | 第17页 |
| ·灭活疫苗 | 第17页 |
| ·基因工程疫苗 | 第17-18页 |
| 6 本研究的目的与意义 | 第18-19页 |
| 实验 1：PPV HN2011 毒株全基因组的测序及其序列分析 | 第19-31页 |
| 摘要 | 第19页 |
| 1 材料与方法 | 第19-25页 |
| ·材料 | 第19-20页 |
| ·细胞及毒株 | 第19页 |
| ·主要试剂和酶 | 第19页 |
| ·主要仪器 | 第19-20页 |
| ·引物设计 | 第20页 |
| ·PPV DNA 模板的提取 | 第20页 |
| ·猪细小病毒全基因序列的分段扩增 | 第20-21页 |
| ·按下列组份配制 PCR 反应液 | 第20页 |
| ·反应程序 | 第20-21页 |
| ·PCR 产物的琼脂糖凝胶电泳 | 第21页 |
| ·PCR 产物胶回收 | 第21-22页 |
| ·PPV 全基因组各片段的克隆 | 第22-23页 |
| ·载体与插入片段连接 | 第22页 |
| ·转化 | 第22页 |
| ·质粒提取 | 第22-23页 |
| ·重组子测序 | 第23页 |
| ·PPV HN2011 分离株核苷酸序列测定及分析 | 第23-25页 |
| 2 实验结果 | 第25-29页 |
| ·PPV 基因组各片段的克隆、鉴定及序列测定 | 第25页 |
| ·PPV 基因组各片段的扩增结果 | 第25页 |
| ·各个阳性克隆测序及其序列拼接结果 | 第25页 |
| ·PPV NS1 与 VP2 基因核苷酸序列分析 | 第25-26页 |
| ·非结构蛋白 NS1 及结构蛋白 VP2 氨基酸压力选择性分析 | 第26-27页 |
| ·国内外 PPV NS1 和 VP2 基因系统发育和分型结果比较 | 第27-28页 |
| ·VP2 衣壳蛋白氨基酸残基分子特征分析 | 第28-29页 |
| 3 讨论 | 第29-31页 |
| 实验 2：杆状病毒表系统表达 PPV VP2 蛋白及 VP2 蛋白的免疫原性研究 | 第31-44页 |
| 摘要 | 第31页 |
| 1 材料与方法 | 第31-38页 |
| ·材料 | 第31页 |
| ·载体与菌种及细胞 | 第31页 |
| ·主要试剂 | 第31页 |
| ·方法 | 第31-38页 |
| ·VP2 基因的克隆 | 第31-32页 |
| ·酶切鉴定阳性重组载体 | 第32页 |
| ·PPV VP2 基因与目的载体 pFastbacⅠ连接鉴定 | 第32页 |
| ·重组 Bacmid DNA 的获得 | 第32-33页 |
| ·提取 PPVVP2Bacmid 重组杆状病毒 | 第33页 |
| ·Sf9 细胞培养 | 第33-34页 |
| ·重组阳性杆粒 PPVVP2Bacmid 转染 Sf9 细胞 | 第34页 |
| ·间接免疫荧光实验验证 Sf9 细胞表达 PPV VP2 蛋白 | 第34-35页 |
| ·SDSPAGE 电泳与 Westernblot 验证 PPV VP2 的表达 | 第35-36页 |
| ·Sf9 细胞表达的 VP2 蛋白血凝试验 | 第36页 |
| ·PPV 阳性血清及 PPV 单克隆抗体对 Sf9 细胞表达的 VP2 蛋白的血凝抑制试验 | 第36-37页 |
| ·重组杆状病毒及其表达的 VP2 蛋白形成 VLPs 的透射电镜观察 | 第37页 |
| ·动物实验 | 第37-38页 |
| 2 实验结果 | 第38-43页 |
| ·PCR 扩增 VP2 基因 | 第38-39页 |
| ·VP2 与 T 载体酶切鉴定 | 第39页 |
| ·pFastbac1PPVVP2 载体酶切验证 | 第39页 |
| ·重组 PPVVP2Bacmid 的 PCR 鉴定 | 第39-40页 |
| ·PPVVP2Bacmid 转染 Sf9 细胞病变 | 第40页 |
| ·间接免疫荧光法检测昆虫细胞表达的 VP2 蛋白 | 第40页 |
| ·PPVVP2 蛋白 SDSPAGE 电泳 | 第40-41页 |
| ·PPVVP2 蛋白 WesternBlot 鉴定 | 第41页 |
| ·PPV 阳性血清及 PPV 单克隆抗体对 Sf9 细胞表达的 VP2 蛋白的 HI 实验 | 第41-42页 |
| ·重组杆状病毒及其表达的 VP2 蛋白形成 VLPs 的透射电镜观察 | 第42-43页 |
| ·动物实验结果 | 第43页 |
| 3 讨论 | 第43-44页 |
| 全文总结 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-50页 |
| ABSTRACT | 第50-52页 |
| 附录 | 第52-55页 |
