| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-23页 |
| ·农杆菌介导的转基因技术 | 第9页 |
| ·农杆菌介导的T-DNA转移的过程 | 第9-14页 |
| ·Ti质粒 | 第10-11页 |
| ·致毒蛋白VirD2的结构与功能 | 第11页 |
| ·VirA-VirG双组份信号转导系统 | 第11-14页 |
| ·vir区基因的诱导表达 | 第12页 |
| ·VirA操纵子的诱导活化 | 第12页 |
| ·VirG的活化进而激活vir区基因的表达 | 第12-13页 |
| ·VBP蛋白及其生物学功能 | 第13-14页 |
| ·农杆菌T-复合物的形成 | 第14-15页 |
| ·T-单链的形成 | 第14页 |
| ·T-复合物的形成 | 第14-15页 |
| ·农杆菌T-复合物的转运通道-Ⅳ型分泌系统(type Ⅳ secretion system,T4SS) | 第15-17页 |
| ·农杆菌T-复合物与Ⅳ型分泌系统的识别 | 第16-17页 |
| ·T-DNA与宿主DNA的整合的机制 | 第17页 |
| ·原核生物的基因表达调控 | 第17-21页 |
| ·原核生物操纵子 | 第17-18页 |
| ·启动子 | 第18-20页 |
| ·原核启动子的保守模式 | 第19页 |
| ·决定原核启动子强弱的因素 | 第19-20页 |
| ·RNA聚合酶 | 第20页 |
| ·原核生物转录因子 | 第20-21页 |
| ·该研究的目的 | 第21-22页 |
| ·该研究的意义 | 第22-23页 |
| 第二章 材料与方法 | 第23-41页 |
| ·细菌、质粒、引物和培养基 | 第23-26页 |
| ·工具酶和试剂盒 | 第26页 |
| ·农杆菌vbp基因调控区结合蛋白的分离与鉴定 | 第26-33页 |
| ·vbp基因上游序列的选定 | 第27-29页 |
| ·磁珠的预处理 | 第29页 |
| ·农杆菌C58菌株的诱导培养 | 第29页 |
| ·超声破碎仪破碎农杆菌C58菌体 | 第29-30页 |
| ·处理好的磁珠与生物素化的DNA结合 | 第30页 |
| ·磁珠DNA复合体与破碎后的蛋白上清结合 | 第30页 |
| ·SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第30-33页 |
| ·MALDI-TOF质谱鉴定 | 第33页 |
| ·转录因子结合位点的鉴定 | 第33-41页 |
| ·vbp1基因启动子序列分析 | 第33-34页 |
| ·验证vbp1基因启动子在探测载体中的转录活性 | 第34-37页 |
| ·PCR扩增带有gfp基因的vbp1启动子序列AB | 第35页 |
| ·序列AB的BamH Ⅰ酶切 | 第35-36页 |
| ·提取大肠杆菌pRSET-A质粒 | 第36页 |
| ·PCR扩增去除T7启动子的pRSET-A载体序列 | 第36页 |
| ·DNA的酶切、酶连和转化 | 第36-37页 |
| ·vbp1基因启动子序列突变位点的设计 | 第37-41页 |
| ·SigmaA结合位点的突变 | 第37-39页 |
| ·转录因子Fnr结合位点中-65位碱基的突变 | 第39-40页 |
| ·转录因子Fnr结合位点中-66位和-68位碱基的突变 | 第40-41页 |
| 第三章 实验结果 | 第41-58页 |
| ·农杆菌vbp基因调控区结合蛋白的分离与鉴定 | 第41-48页 |
| ·vbp基因上游序列的选定 | 第41-42页 |
| ·vbp基因上游调控区结合蛋白的分离结果 | 第42-44页 |
| ·MALDI-TOF质谱鉴定结果 | 第44-48页 |
| ·转录因子结合位点的鉴定 | 第48-58页 |
| ·vbp1基因启动子序列分析结果 | 第48-51页 |
| ·验证vbp1基因启动子在探测载体中的转录活性 | 第48-51页 |
| ·突变位点的设计 | 第51-58页 |
| ·SigmaA结合位点的突变对vbp1基因启动子转录活性的影响 | 第51-52页 |
| ·转录因子Fnr结合位点中-65位碱基的突变对vbp1基因启动子转录活性的影响 | 第52-54页 |
| ·转录因子Fnr结合位点中-66位和-68位碱基的突变对vbp1基因启动子转录活性的影响 | 第54-55页 |
| ·重组质粒中表达的荧光蛋白的定量分析 | 第55-58页 |
| 第四章 实验讨论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第65-66页 |
