| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 图表目录 | 第8-10页 |
| 英文缩写对照表 | 第10-12页 |
| 引言 | 第12-20页 |
| 1 国内外研究现状 | 第12-17页 |
| ·猪嵴病毒的分类 | 第12-13页 |
| ·猪嵴病毒基因组结构及功能 | 第13-15页 |
| ·猪嵴病毒的发现与感染状况 | 第15-16页 |
| ·猪嵴病毒的危害 | 第16-17页 |
| ·猪嵴病毒感染的诊断与监测 | 第17页 |
| 2 研究目的与意义 | 第17页 |
| 3 研究内容与技术路线 | 第17-20页 |
| ·研究内容 | 第17-19页 |
| ·技术路线 | 第19-20页 |
| 材料与方法 | 第20-39页 |
| 1 材料 | 第20-26页 |
| ·猪嵴病毒阳性样本 | 第20页 |
| ·血清 | 第20页 |
| ·载体与菌株 | 第20页 |
| ·主要试剂和溶液 | 第20-25页 |
| ·主要仪器设备 | 第25-26页 |
| ·猪嵴病毒核苷酸参考序列 | 第26页 |
| 2 试验方法 | 第26-39页 |
| ·原核表达重组质粒的构建 | 第26-33页 |
| ·重组质粒pET-32a-XDVP1的诱导表达 | 第33-34页 |
| ·表达产物的检测、鉴定和纯化 | 第34-35页 |
| ·PKV VP1抗体检测ELISA方法的建立 | 第35-38页 |
| ·猪嵴病毒抗体检测ELISA方法的应用 | 第38-39页 |
| 结果与分析 | 第39-56页 |
| 1. 猪嵴病毒VP1抗原表位分析 | 第39页 |
| 2. 表达猪嵴病毒VP1基因重组质粒的构建与鉴定 | 第39-41页 |
| ·PKV VP1基因片段的扩增 | 第39-40页 |
| ·PKV VP1原核表达重组质粒的鉴定 | 第40-41页 |
| ·PKV VP1原核表达重组质粒的序列测定 | 第41页 |
| 3 PKV VP1原核表达重组质粒的诱导表达和重组蛋白的鉴定 | 第41-45页 |
| ·PKV VP1原核表达重组质粒的诱导表达 | 第41-43页 |
| ·重组蛋白的可溶性及纯化 | 第43-45页 |
| ·重组蛋白的Western blotting分析 | 第45页 |
| 4 PKV VP1抗体检测ELISA方法的建立 | 第45-55页 |
| ·重组蛋白包被浓度和二抗稀释度的确定 | 第45-46页 |
| ·重组蛋白包被条件的确定 | 第46-47页 |
| ·血清稀释度的确定 | 第47-48页 |
| ·封闭液及血清稀释液的确定 | 第48页 |
| ·封闭时间的确定 | 第48-49页 |
| ·血清样本反应时间的确定 | 第49-50页 |
| ·酶标二抗反应时间的确定 | 第50页 |
| ·底物反应时间的确定 | 第50-51页 |
| ·阴阳性临界值的确定 | 第51-53页 |
| ·交叉反应试验 | 第53页 |
| ·重复性试验 | 第53-54页 |
| ·PKV抗体检测的间接ELISA方法的操作程序 | 第54-55页 |
| 5 PKV抗体检测ELISA方法的应用 | 第55-56页 |
| 讨论 | 第56-57页 |
| 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |