| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 符号和縮略语说明 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-29页 |
| 第一节 灵芝及灵芝三萜研究进展 | 第13-22页 |
| ·灵芝的分类地位 | 第13页 |
| ·灵芝的药用价值 | 第13页 |
| ·灵芝三萜研究进展 | 第13-19页 |
| ·灵芝三萜的化学结构 | 第13-14页 |
| ·灵芝三萜的药理活性 | 第14-16页 |
| ·灵芝三萜的生物合成 | 第16-19页 |
| ·灵芝的分子生物学研究 | 第19-21页 |
| ·灵芝分类学的研究 | 第19页 |
| ·灵芝转化系统的研究 | 第19页 |
| ·灵芝基因克隆方面的进展 | 第19-21页 |
| ·茉莉酸类化合物诱导次生代谢的相关研究 | 第21-22页 |
| 第二节 功能基因组学研究进展 | 第22-27页 |
| ·功能基因组学 | 第22-23页 |
| ·功能基因组学研究常用技术 | 第23页 |
| ·MRNA差异显示法 | 第23页 |
| ·抑制性消减杂交 | 第23-24页 |
| ·表达序列标签 | 第24页 |
| ·基因表达系列分析 | 第24页 |
| ·CDNA微阵列 | 第24页 |
| ·全转录组测序 | 第24-26页 |
| ·CDNA-AFLP技术 | 第26-27页 |
| 第三节 本研究的目的意义和技术路线 | 第27-29页 |
| ·研究意义 | 第27页 |
| ·研究内容 | 第27-28页 |
| ·预期目标 | 第28页 |
| ·技术路线 | 第28-29页 |
| 第二章 茉莉酸甲酯对灵芝三萜生物合成的影响 | 第29-47页 |
| 第一节 茉莉酸甲酯诱导灵芝三萜生物合成 | 第29-32页 |
| 1 实验材料 | 第29页 |
| 2 实验方法 | 第29-30页 |
| ·液体培养方法 | 第29页 |
| ·灵芝三萜测定方法 | 第29-30页 |
| ·MeJA诱导条件 | 第30页 |
| ·统计分析方法 | 第30页 |
| 3 实验结果 | 第30-31页 |
| 4 讨论 | 第31-32页 |
| 第二节 通过均匀设计实验优化茉莉酸甲酯诱导灵芝三萜生物合成的条件 | 第32-37页 |
| 1 实验材料 | 第32-33页 |
| ·菌株、试剂 | 第32页 |
| ·菌株培养 | 第32-33页 |
| 2 实验方法 | 第33-34页 |
| ·均匀设计实验的参数 | 第33页 |
| ·均匀设计实验中MeJA诱导条件 | 第33页 |
| ·均匀设计实验的分析方法 | 第33-34页 |
| ·均匀设计结果的验证 | 第34页 |
| 3 实验结果 | 第34-36页 |
| 4 讨论 | 第36-37页 |
| 第三节 茉莉酸甲酯对灵芝三萜生物合成途径中关键酶编码基因的影响 | 第37-47页 |
| 1 实验材料 | 第37页 |
| ·菌株、试剂 | 第37页 |
| ·菌株培养 | 第37页 |
| 2 实验方法 | 第37-41页 |
| ·灵芝菌丝体发酵及MeJA诱导 | 第37-38页 |
| ·灵芝总RNA的提取及cDNA制备 | 第38-39页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第39-41页 |
| 3 实验结果 | 第41-45页 |
| ·灵芝总RNA提取结果 | 第41-42页 |
| ·不同浓度MeJA诱导条件下基因转录水平变化 | 第42-44页 |
| ·不同时间MeJA诱导条件下基因转录水平变化 | 第44-45页 |
| ·MeJA最佳诱导条件下基因转录水平变化 | 第45页 |
| 4 讨论 | 第45-47页 |
| 第三章 应用CDNA-AFLP技术筛选茉莉酸甲酯诱导的灵芝差异表达基因 | 第47-79页 |
| 1 实验材料 | 第47-48页 |
| ·菌株和质粒 | 第47页 |
| ·菌株培养 | 第47-48页 |
| ·主要仪器 | 第48页 |
| ·酶和生化试剂 | 第48页 |
| 2 实验方法 | 第48-58页 |
| ·接种、培养和样品处理 | 第48页 |
| ·RNA提取及cDNA第一条链合成 | 第48-49页 |
| ·双链cDNA的合成 | 第49-50页 |
| ·cDNA-AFLP分析 | 第50-55页 |
| ·cDNA-AFLP差异片段回收 | 第55-56页 |
| ·琼脂糖纯化回收、TA克隆与测序 | 第56-57页 |
| ·基因注释及功能分类 | 第57页 |
| ·Q-RT PCR验证差异表达基因 | 第57-58页 |
| 3 实验结果 | 第58-75页 |
| ·灵芝总RNA的提取 | 第58页 |
| ·灵芝总RNA的浓度和纯度测定 | 第58-59页 |
| ·灵芝cDNA-AFLP分析 | 第59-63页 |
| ·TDF的回收、测序分析 | 第63-74页 |
| ·Q-RT PCR验证 | 第74-75页 |
| 4 讨论 | 第75-79页 |
| 第四章 灵芝MAPK、RHO、MOB基因的克隆及其生物信息学特性分析 | 第79-99页 |
| 1 实验材料 | 第79页 |
| ·菌株和质粒 | 第79页 |
| ·菌株培养 | 第79页 |
| ·酶和生化试剂 | 第79页 |
| 2 实验方法 | 第79-85页 |
| ·灵芝基因组DNA的提取 | 第79-80页 |
| ·灵芝QT-cDNA的制备 | 第80页 |
| ·灵芝Rho、MAPK、Mob基因特异片段的克隆 | 第80页 |
| ·灵芝MAPK、Rho、Mob基因DNA 5'端及其启动子的克隆 | 第80-82页 |
| ·灵芝MAPK、Rho、Mob基因cDNA 3'端及其3'非翻译区的克隆 | 第82-84页 |
| ·灵芝MAPK、Rho、Mob基因的基因组DNA全长及cDNA全长的克隆 | 第84页 |
| ·灵芝MAPK、Rho和Mob基因的生物信息学分析 | 第84-85页 |
| 3 实验结果 | 第85-97页 |
| ·灵芝MAPK、Rho、Mob基因特异片段的克隆 | 第85-87页 |
| ·灵芝MAPK、Rho、Mob基因DNA 5'端及其启动子的克隆 | 第87页 |
| ·灵芝MAPK、Rho、Mob基因cDNA 3'端及其3'非翻译区的克隆 | 第87-88页 |
| ·灵芝MAPK、Rho、Mob基因的基因组DNA全长及cDNA全长的克隆 | 第88-91页 |
| ·灵芝MAPK、Rho、Mob基因启动子分析 | 第91-93页 |
| ·灵芝MAPK、Rho、Mob基因编码蛋白的基本特性和功能域分析 | 第93-94页 |
| ·灵芝MAPK、Rho、Mob基因编码蛋白的系统发育树构建 | 第94-96页 |
| ·灵芝MAPK、Rho、Mob基因编码蛋白的亚细胞定位预测 | 第96-97页 |
| 4 讨论 | 第97-99页 |
| 第五章 灵芝小G蛋白编码基因(RHO基因)在灵芝三萜生物合成中的功能分析 | 第99-113页 |
| 1 实验材料 | 第99页 |
| ·菌株和质粒 | 第99页 |
| ·菌株培养 | 第99页 |
| ·生化试剂和仪器 | 第99页 |
| 2 实验方法 | 第99-106页 |
| ·灵芝cDNA的合成 | 第99-100页 |
| ·灵芝rho的亚细胞定位 | 第100-102页 |
| ·灵芝rho的过量表达 | 第102-105页 |
| ·灵芝rho的基因沉默 | 第105-106页 |
| 3 结果与讨论 | 第106-111页 |
| ·Gl-rho基因亚细胞定位 | 第106-107页 |
| ·Gl-rho基因过量表达分析 | 第107-109页 |
| ·Gl-rho基因沉默分析 | 第109-111页 |
| 4 讨论 | 第111-113页 |
| 全文总结 | 第113-115页 |
| 参考文献 | 第115-129页 |
| 创新点 | 第129-131页 |
| 文章发表情况 | 第131-133页 |
| 附录 | 第133-135页 |
| 致谢 | 第135页 |
