| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-24页 |
| 轮状病毒的研究进展 | 第11-17页 |
| ·轮状病毒的流行病学 | 第12-13页 |
| ·轮状病毒的防治 | 第13-15页 |
| ·轮状病毒的免疫预防 | 第13-14页 |
| ·RV 发病后的对策 | 第14-15页 |
| ·轮状病毒诊断方法的研究进展 | 第15-17页 |
| ·传统病原学检测技术 | 第15-16页 |
| ·免疫学检测技术 | 第16页 |
| ·核酸探针技术 | 第16-17页 |
| ·电泳技术 | 第17页 |
| ·PCR 技术 | 第17页 |
| 实时荧光定量 PCR | 第17-24页 |
| ·实时荧光定量 PCR 方法的原理 | 第18-19页 |
| ·荧光定量 PCR 的荧光化学 | 第19-21页 |
| ·与 DNA 结合的荧光染料 | 第19页 |
| ·荧光探针 | 第19-21页 |
| ·荧光定量 PCR 的应用 | 第21-22页 |
| ·多重荧光定量 PCR 的应用 | 第22页 |
| ·本论文的研究目的和意义 | 第22-24页 |
| 第二章 VP7 基因重组质粒的构建 | 第24-35页 |
| ·实验材料 | 第24-25页 |
| ·病毒样品 | 第24页 |
| ·引物 | 第24页 |
| ·主要试剂和药品 | 第24页 |
| ·主要设备 | 第24-25页 |
| ·实验材料的处理 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-30页 |
| ·病毒总 RNA 的逆转录 | 第25-26页 |
| ·PCR 产物纯化 | 第26-27页 |
| ·VP7 基因的 TA 连接 | 第27页 |
| ·制备感受态 | 第27-28页 |
| ·DH5α细胞转化与单克隆的培养 | 第28页 |
| ·单克隆的菌液 PCR | 第28-29页 |
| ·重组质粒的提取及鉴定 | 第29-30页 |
| ·重组质粒的定量 | 第30页 |
| ·实验结果与讨论 | 第30-34页 |
| ·逆转录 VP7 全长基因电泳鉴定 | 第30-31页 |
| ·单克隆菌液 PCR 结果 | 第31-32页 |
| ·重组质粒电泳结果 | 第32-33页 |
| ·重组质粒定量结果 | 第33-34页 |
| ·本章小结 | 第34-35页 |
| 第三章 G1+G9 二重荧光定量 PCR 体系的构建 | 第35-55页 |
| ·实验材料 | 第35-36页 |
| ·样品及试剂 | 第35页 |
| ·引物和探针 | 第35页 |
| ·主要设备 | 第35-36页 |
| ·实验方法 | 第36-43页 |
| ·普通 PCR 分析分型引物扩增效果 | 第36页 |
| ·染料法荧光定量 PCR 分析分型引物扩增效果 | 第36-37页 |
| ·G1+G9 二重荧光定量 PCR 体系的构建 | 第37-41页 |
| ·单重条件下探针特异性验证及浓度的优化 | 第37-38页 |
| ·G1+G9 二重荧光定量 PCR 体系的优化 | 第38-41页 |
| ·G1+G9 二重荧光定量 PCR 体系验证 | 第41-42页 |
| ·G1+G9 二重反应标准曲线的建立 | 第42页 |
| ·cDNA 在 G1+G9 二重体系中的验证 | 第42-43页 |
| ·实验结果与讨论 | 第43-53页 |
| ·普通 PCR 分型引物的分型效果 | 第43页 |
| ·梯度 PCR 对分型引物的分型效果 | 第43-44页 |
| ·特异性引物染料法荧光定量 PCR 结果 | 第44-46页 |
| ·探针特异性的检验 | 第46-47页 |
| ·G1+G9 二重体系中各组分优化结果 | 第47-50页 |
| ·引物探针优化结果 | 第47-48页 |
| ·Mg~(2+)浓度优化结果 | 第48页 |
| ·酶浓度优化结果 | 第48-49页 |
| ·dNTP 浓度的优化结果 | 第49页 |
| ·甜菜碱浓度的优化结果 | 第49-50页 |
| ·G1+G9 二重荧光定量 PCR 体系验证结果 | 第50-51页 |
| ·二重体系特异性的验证结果 | 第50页 |
| ·二重体系重复性的验证结果 | 第50-51页 |
| ·二重体系干扰性的验证 | 第51页 |
| ·G1+G9 二重荧光定量 PCR 体系敏感性实验与标准曲线的建立 | 第51-52页 |
| ·cNDA 在二重体系中验证的结果 | 第52-53页 |
| ·本章小结 | 第53-55页 |
| 第四章 G1+G3+G9 三重荧光定量 PCR 体系的构建 | 第55-62页 |
| ·实验材料 | 第55-56页 |
| ·样品及试剂 | 第55页 |
| ·引物和探针 | 第55页 |
| ·主要设备 | 第55-56页 |
| ·实验方法 | 第56-57页 |
| ·G3 引物探针特异性验证 | 第56页 |
| ·G1+G3+G9 三重荧光定量 PCR 体系特异性验证 | 第56-57页 |
| ·G1+G3+G9 三重反应标准曲线的建立 | 第57页 |
| ·实验结果与讨论 | 第57-60页 |
| ·G3 探针特异性验证结果 | 第57-58页 |
| ·G1+G3+G9 三重荧光定量 PCR 体系特异性验证结果 | 第58-59页 |
| ·G1+G3+G9 三重反应标准曲线的建立 | 第59-60页 |
| ·本章小结 | 第60-62页 |
| 结论与展望 | 第62-64页 |
| 结论 | 第62页 |
| 本论文的创新性 | 第62页 |
| 展望与设想 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-68页 |
| 附录 | 第68-70页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 附件 | 第72页 |
