| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-6页 |
| 目录 | 第6-10页 |
| 第一章 国内外研究进展 | 第10-41页 |
| ·免疫系统 | 第10-18页 |
| ·免疫器官 | 第10-11页 |
| ·免疫细胞 | 第11-12页 |
| ·免疫相关分子 | 第12-18页 |
| ·抗体的种类与结构 | 第12-15页 |
| ·抗体多样性的分子基础 | 第15-17页 |
| ·抗体的功能与特性 | 第17-18页 |
| ·抗体药物研究进展 | 第18-28页 |
| ·治疗性抗体的应用 | 第19-24页 |
| ·治疗性抗体的作用机制 | 第24-25页 |
| ·治疗性抗体的制备技术 | 第25-28页 |
| ·单克隆抗体技术 | 第25-27页 |
| ·基因工程抗体技术 | 第27-28页 |
| ·噬菌体抗体展示技术 | 第28-35页 |
| ·噬菌体展示技术原理 | 第28-31页 |
| ·噬菌体抗体展示技术 | 第31-33页 |
| ·噬菌体抗体库分类 | 第33-34页 |
| ·噬菌体抗体库的筛选 | 第34-35页 |
| ·TNF-α与 TNF-α抑制剂 | 第35-41页 |
| ·TNF-α与 TNF-α受体 | 第35-36页 |
| ·TNF-α的生物学功能 | 第36-38页 |
| ·TNF-α抑制剂 | 第38-41页 |
| 第二章 研究目的意义及技术方案 | 第41-44页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第41-42页 |
| ·主要研究内容 | 第42-43页 |
| ·技术路线 | 第43-44页 |
| 第三章 天然人源 scFv 噬菌体抗体库的构建 | 第44-72页 |
| ·引言 | 第44页 |
| ·材料 | 第44-50页 |
| ·载体、菌株及血样来源 | 第44页 |
| ·主要试剂 | 第44-45页 |
| ·主要培养基配方 | 第45-46页 |
| ·主要溶液配方 | 第46-48页 |
| ·引物及其序列 | 第48-49页 |
| ·仪器设备 | 第49-50页 |
| ·方法 | 第50-60页 |
| ·人淋巴细胞的分离纯化 | 第50页 |
| ·总 RNA 提取 | 第50-51页 |
| ·cDNA 的合成 | 第51页 |
| ·DNA 片段回收 | 第51-53页 |
| ·DNA 凝胶电泳检测及切胶回收 | 第51-52页 |
| ·反应液中直接回收 DNA | 第52页 |
| ·DNA 片段的乙醇沉淀 | 第52-53页 |
| ·scFv 基因克隆及拼接 | 第53-56页 |
| ·抗体 VH 基因的克隆及装配 | 第53-55页 |
| ·抗体 VL 基因的克隆 | 第55页 |
| ·scFv 拼接 | 第55-56页 |
| ·载体 pCANTAB 5 E 及 scFv 连接产物制备 | 第56-57页 |
| ·pCANTAB 5 E DNA 转化感受态细胞 DH5α | 第56页 |
| ·pCANTAB 5 E 质粒 DNA 的提取 | 第56页 |
| ·载体 pCANTAB 5 E 及 scFv 酶切片段的制备及连接 | 第56-57页 |
| ·连接产物电转化感受态 TG1 | 第57-58页 |
| ·TG1 感受态细胞(Compenent cells)的制备 | 第57-58页 |
| ·DNA 片段的连接和转化 | 第58页 |
| ·噬菌体 scFv 抗体库的构建 | 第58-60页 |
| ·辅助噬菌体毒种制备 | 第58页 |
| ·噬菌体毒种滴定 | 第58-59页 |
| ·电转化及库容鉴定 | 第59页 |
| ·噬菌体库构建 | 第59-60页 |
| ·结果与分析 | 第60-67页 |
| ·人淋巴细胞总 RNA 的提取及 cDNA 的合成 | 第60页 |
| ·PCR 扩增抗体 VH 基因 | 第60-62页 |
| ·PCR 扩增抗体 V L 基因 | 第62-63页 |
| ·OE-PCR 拼接完整 scFv 分子基因 | 第63页 |
| ·pCANTAB 5E-scFv 载体的制备 | 第63-66页 |
| ·噬菌体 scFv 抗体库的构建 | 第66页 |
| ·噬菌体 scFv 抗体库多样性 | 第66-67页 |
| ·讨论 | 第67-72页 |
| 第四章 噬菌体单链抗体库的富集筛选 | 第72-83页 |
| ·引言 | 第72页 |
| ·材料 | 第72-73页 |
| ·主要试剂 | 第72页 |
| ·主要溶液配方 | 第72-73页 |
| ·仪器设备 | 第73页 |
| ·方法 | 第73-76页 |
| ·噬菌体库的扩增 | 第73-74页 |
| ·微孔板筛选法筛选抗体库 | 第74页 |
| ·重组噬菌体的小量制备 | 第74-75页 |
| ·Phage ELISA | 第75页 |
| ·梯度 ELSIA | 第75-76页 |
| ·结果与分析 | 第76-80页 |
| ·噬菌体库富集筛选 | 第76-77页 |
| ·Phage ELISA 法检测抗 NS1 重组噬菌体亲和性 | 第77-78页 |
| ·Phage ELISA 筛选抗 TNF-α重组噬菌体 | 第78-79页 |
| ·噬菌体基因测序 | 第79-80页 |
| ·讨论 | 第80-83页 |
| 第五章 scFv 重组蛋白的表达及其 TNF-α抑制活性测定 | 第83-99页 |
| ·引言 | 第83页 |
| ·材料 | 第83-86页 |
| ·主要试剂 | 第83页 |
| ·常用溶液配方 | 第83-85页 |
| ·引物及其序列 | 第85-86页 |
| ·仪器设备 | 第86页 |
| ·方法 | 第86-90页 |
| ·scFv 表达载体构建 | 第86-87页 |
| ·基因工程菌构建 | 第87-88页 |
| ·scFv 重组蛋白表达及分析 | 第88页 |
| ·重组蛋白表达检测 | 第88页 |
| ·表达条件优化 | 第88页 |
| ·可溶性分析 | 第88页 |
| ·scFv 的纯化及变复性 | 第88-89页 |
| ·MTT 法检测 TNF-α活性 | 第89-90页 |
| ·抗 TNF-α scFv 活性测定 | 第90页 |
| ·结果与分析 | 第90-96页 |
| ·表达载体及基因工程菌构建 | 第90-91页 |
| ·scFv 重组蛋白表达及分析 | 第91-93页 |
| ·重组蛋白的可溶性分析 | 第93页 |
| ·表达蛋白纯化 | 第93-94页 |
| ·TNF-α活性测定 | 第94-95页 |
| ·scFv 抗 TNF-α活性试验 | 第95-96页 |
| ·讨论 | 第96-99页 |
| 总结 | 第99-100页 |
| 参考文献 | 第100-109页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第109-110页 |
| 附录 | 第110-117页 |
| 致谢 | 第117页 |
