| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-19页 |
| 1 前言 | 第11页 |
| 2 生长激素研究进展 | 第11-14页 |
| ·生长激素作用机理 | 第11-12页 |
| ·生长激素的生理功能研究 | 第12-14页 |
| ·促生长作用 | 第12页 |
| ·对物质代谢的影响 | 第12页 |
| ·对生殖生理的影响 | 第12-13页 |
| ·对免疫功能的影响 | 第13页 |
| ·其它作用 | 第13-14页 |
| ·影响生长激素分泌的因素 | 第14页 |
| 3 生长激素基因工程菌研究进展 | 第14-18页 |
| ·生长激素基因工程菌的构建及表达研究 | 第14-16页 |
| ·生长激素基因在大肠杆菌中表达 | 第14-15页 |
| ·生长激素基因在酵母中表达 | 第15页 |
| ·生长激素在其它表达系统中的表达 | 第15-16页 |
| ·外源生长激素的吸收机理 | 第16页 |
| ·生长激素基因工程菌安全性评价 | 第16-17页 |
| ·外源生长激素残留问题 | 第16-17页 |
| ·诱导剂的副作用 | 第17页 |
| ·生长激素基因工程菌的应用 | 第17-18页 |
| 4 研究目的和意义 | 第18-19页 |
| 第二章 重组生长激素酵母的构建 | 第19-32页 |
| 1 材料与方法 | 第19-26页 |
| ·材料 | 第19-20页 |
| ·实验动物 | 第19页 |
| ·菌株和质粒 | 第19页 |
| ·主要药品和试剂 | 第19-20页 |
| ·培养基 | 第20页 |
| ·方法 | 第20-26页 |
| ·引物设计 | 第20-21页 |
| ·青鱼脑垂体总RNA提取 | 第21页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第21页 |
| ·青鱼GH-cDNA克隆 | 第21-22页 |
| ·pPIC3.5K-bcGH表达载体的构建 | 第22页 |
| ·转化酵母细胞 | 第22-23页 |
| ·多拷贝转化子的筛选及鉴定 | 第23页 |
| ·重组酵母诱导表达和考染检测 | 第23-24页 |
| ·蛋白纯化及Elisa鉴定 | 第24-25页 |
| ·目的蛋白定量检测 | 第25-26页 |
| 2 结果与分析 | 第26-30页 |
| ·脑垂体总RNA提取结果 | 第26页 |
| ·青鱼生长激素cDNA片段扩增 | 第26页 |
| ·重组表达载体pPIC3.5K-bcGH的构建与鉴定 | 第26-27页 |
| ·重组酵母的获得与鉴定 | 第27页 |
| ·表达产物的鉴定及其表达条件优化 | 第27-28页 |
| ·表达产物纯化及ELISA鉴定 | 第28-29页 |
| ·目的蛋白含量测定 | 第29-30页 |
| 3 讨论 | 第30-32页 |
| 第三章 重组生长激素酵母液态发酵条件的研究 | 第32-43页 |
| 1 材料与试剂 | 第32页 |
| ·菌株 | 第32页 |
| ·主要药品与试剂 | 第32页 |
| ·培养基 | 第32页 |
| 2 试验方法 | 第32-34页 |
| ·种子培养方法 | 第32-33页 |
| ·发酵培养方法 | 第33页 |
| ·10L发酵罐发酵 | 第33页 |
| ·活菌数和bcGH表达量的检测 | 第33-34页 |
| ·YPD平板计数法检测 | 第33页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测 | 第33-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-42页 |
| ·发酵条件单因素试验 | 第34-39页 |
| ·发酵时间对重组bcGH酵母生长及其表达量的影响 | 第34-35页 |
| ·发酵温度对重组bcGH酵母生长及其表达量的影响 | 第35-36页 |
| ·接种量对重组bcGH酵母生长及其表达量的影响 | 第36页 |
| ·豆粕浓度对重组bcGH酵母生长及其表达量的影响 | 第36-37页 |
| ·诱导剂浓度对重组bcGH酵母生长及其表达量的影响 | 第37-38页 |
| ·pH值对重组bcGH酵母生长及其表达量的影响 | 第38-39页 |
| ·发酵条件多因子正交试验 | 第39-41页 |
| ·发酵因素与水平的确定 | 第39-40页 |
| ·正交试验结果及分析 | 第40-41页 |
| ·正交试验验证试验 | 第41页 |
| ·10L发酵罐发酵试验结果 | 第41-42页 |
| 4 讨论 | 第42-43页 |
| 第四章 重组生长激素酵母饲料促生长作用及其机理的研究 | 第43-53页 |
| 1 材料与试剂 | 第43页 |
| ·材料 | 第43页 |
| ·试剂 | 第43页 |
| 2 试验方法 | 第43-47页 |
| ·试验饲料设计 | 第43-44页 |
| ·饲养试验 | 第44-45页 |
| ·指标测定及方法 | 第45页 |
| ·生长性能指标 | 第45页 |
| ·血清指标 | 第45页 |
| ·引物设计 | 第45-46页 |
| ·湘云鲫肝脏总RNA制备 | 第46页 |
| ·总RNA提取及电泳检测 | 第46页 |
| ·总RNA Dnase酶处理 | 第46页 |
| ·IGFs-cDNA片段克隆 | 第46-47页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第47页 |
| ·数据处理 | 第47页 |
| 3 结果与分析 | 第47-51页 |
| ·对鲫鱼生长性能的影响 | 第47-48页 |
| ·对鲫鱼血清指标的影响 | 第48-49页 |
| ·RNA浓度测定及质量鉴定 | 第49页 |
| ·PCR扩增检测 | 第49-50页 |
| ·对鲫鱼肝脏IGFs mRNA表达影响 | 第50-51页 |
| 4 讨论 | 第51-53页 |
| 结论 | 第53-54页 |
| 创新与后续工作 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-68页 |
| 英文缩写名词索引 | 第68-69页 |
| 附录 | 第69-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 作者简介 | 第73页 |
