| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-29页 |
| ·未培养微生物 | 第12-16页 |
| ·微生物资源与未培养微生物概述 | 第12页 |
| ·未培养微生物资源开发的研究方法 | 第12-16页 |
| ·酪氨酸合成 | 第16-18页 |
| ·酪氨酸的工业合成 | 第16-17页 |
| ·酪氨酸在生物体内的合成 | 第17-18页 |
| ·TyrA蛋白家族 | 第18-28页 |
| ·TyrA蛋白家族与酪氨酸合成 | 第18-20页 |
| ·TyrA蛋白家族的系统进化分析 | 第20-21页 |
| ·TyrA的催化区域 | 第21-22页 |
| ·TyrA蛋白的调节 | 第22-23页 |
| ·TyrA蛋白的催化机制 | 第23页 |
| ·Escherichia coli的TyrA | 第23-24页 |
| ·TyrA的空间结构 | 第24-28页 |
| ·本课题的研究目的 | 第28-29页 |
| 第二章 材料与方法 | 第29-43页 |
| ·实验材料 | 第29-31页 |
| ·筛选文库 | 第29页 |
| ·菌株和质粒 | 第29页 |
| ·培养基 | 第29-30页 |
| ·抗生素 | 第30页 |
| ·菌体培养 | 第30页 |
| ·菌种保存 | 第30-31页 |
| ·仪器、试剂和溶液配制 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-43页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第31-32页 |
| ·PCR扩增目标DNA | 第32页 |
| ·胶回收纯化DNA片段 | 第32-33页 |
| ·PCR产物纯化 | 第33页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳检测DNA | 第33-34页 |
| ·DNA的酶切 | 第34页 |
| ·DNA的连接反应 | 第34-35页 |
| ·感受态细胞制备 | 第35-36页 |
| ·化学转化法 | 第36页 |
| ·目的蛋白样品的制备 | 第36-37页 |
| ·亲和层析纯化目的蛋白 | 第37-38页 |
| ·超滤脱盐 | 第38-39页 |
| ·SDS-PAGE | 第39-40页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第40-41页 |
| ·预苯酸脱氢酶酶活检测 | 第41-43页 |
| 第三章 tyrA基因的筛选及其生物信息学分析 | 第43-52页 |
| ·tyrA基因的筛选 | 第43-44页 |
| ·tyrA基因pdhE的生物信息学分析 | 第44-51页 |
| ·相似性检索 | 第44-46页 |
| ·PdhE的理化性质预测 | 第46页 |
| ·PdhE的信号肽预测 | 第46页 |
| ·PdhE的跨膜结构域预测 | 第46页 |
| ·PdhE的亲疏水性预测 | 第46-47页 |
| ·PdhE的二级结构预测 | 第47-48页 |
| ·PdhE的功能域预测 | 第48页 |
| ·PdhE的系统发育分析 | 第48-49页 |
| ·蛋白PdhE的多重序列比对分析 | 第49-51页 |
| ·小结 | 第51-52页 |
| 第四章 pdhE基因的克隆、表达和功能鉴定 | 第52-56页 |
| ·pdhE基因的克隆 | 第52页 |
| ·pdhE在大肠杆菌中表达 | 第52-54页 |
| ·重组质粒pETBlue-2/pdhE的构建 | 第52-54页 |
| ·重组质粒pETBlue-2/pdhE导入表达宿主 | 第54页 |
| ·pdhE的表达和表达产物纯化 | 第54页 |
| ·重组蛋白PdhE的功能鉴定 | 第54-55页 |
| ·小结 | 第55-56页 |
| 第五章 pdhE-1基因的克隆、表达和功能鉴定 | 第56-68页 |
| ·融合PCR获得融合蛋白编码基因 | 第56-59页 |
| ·pdhE部分DNA片段的PCR扩增 | 第56-57页 |
| ·大肠杆菌K-12菌株tyrA基因部分DNA片段PCR扩增 | 第57-58页 |
| ·融合PCR获得融合蛋白编码序列 | 第58-59页 |
| ·pdhE-1在大肠杆菌中表达 | 第59-61页 |
| ·重组质粒pETBlue-2/pdhE-1的构建 | 第59-61页 |
| ·重组质粒pETBlue-2/pdhE-1导入表达宿主 | 第61页 |
| ·pdhE-1的表达和表达产物纯化 | 第61页 |
| ·重组蛋白PdhE-1的生化性质的测定 | 第61-67页 |
| ·pH值对重组蛋白PdhE-1的影响 | 第62-63页 |
| ·温度对重组蛋白PdhE-1的影响 | 第63-64页 |
| ·金属离子对重组蛋白PdhE-1的影响 | 第64-65页 |
| ·EDTA对酶活力的影响 | 第65页 |
| ·重组蛋白PdhE-1的催化动力学分析 | 第65-66页 |
| ·L-酪氨酸对重组蛋白PdhE-1的影响 | 第66-67页 |
| ·小结 | 第67-68页 |
| 第六章 总结、讨论与展望 | 第68-70页 |
| ·总结与讨论 | 第68-69页 |
| ·展望 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第79页 |
