| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-14页 |
| 符号说明 | 第14-16页 |
| 第一部分 综述:甲壳动物先天免疫研究 | 第16-43页 |
| 第一章 甲壳动物病原及先天免疫机制 | 第17-35页 |
| 1 病原及病原相关分子模式 | 第17-24页 |
| 2 甲壳动物先天免疫防御机制研究 | 第24-32页 |
| 3 甲壳动物抗病毒机制研究 | 第32-35页 |
| 第二章 KAZAL型丝氨酸蛋白酶抑制因子的研究进展 | 第35-43页 |
| 1 丝氨酸蛋白酶及丝氨酸蛋白酶抑制因子 | 第35-36页 |
| 2 Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制因子的结构特点 | 第36-38页 |
| 3 Kazal抑制因子的抑制特异性及抑制机制 | 第38-40页 |
| 4 KazaL抑制因子的生物学及生理功能 | 第40-41页 |
| 5 Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制因子的研究意义 | 第41-43页 |
| 第二部分 克氏原螯虾cDNA文库的构建及Kazal型抑制因子的克隆、表达及功能分析 | 第43-104页 |
| 第一章 WSSV荧光定量PCR检测方法的建立 | 第43-55页 |
| 一、引言 | 第43-44页 |
| 二、材料与方法 | 第44-48页 |
| 1 材料 | 第44页 |
| ·实验用虾 | 第44页 |
| ·试剂与仪器 | 第44页 |
| ·主要溶液配方 | 第44页 |
| 2 方法 | 第44-48页 |
| ·引物设计 | 第44-45页 |
| ·标准品质粒的制备 | 第45-48页 |
| ·标准品质粒定量及稀释 | 第48页 |
| ·荧光定量PCR反应体系相关参数确定 | 第48页 |
| ·标准曲线的绘出 | 第48页 |
| ·实时荧光定量PCR的特异性、敏感性检测 | 第48页 |
| 三、结果 | 第48-52页 |
| 1 片段1 PCR扩增结果 | 第48-49页 |
| 2 克隆载体的PCR鉴定与重组质粒的酶切鉴定 | 第49页 |
| 3 测序结果 | 第49页 |
| 4 标准品质粒浓度 | 第49-50页 |
| 5 反应体系的优化 | 第50-51页 |
| 6 标准曲线的生成 | 第51页 |
| 7 特异性、敏感性检测 | 第51-52页 |
| 四、讨论 | 第52-55页 |
| 第二章 克氏原螯虾Kazal型抑制因子的基因克隆及表达模式分析 | 第55-74页 |
| 一、前言 | 第55-56页 |
| 二、材料和方法 | 第56-61页 |
| 1.材料 | 第56-57页 |
| ·实验材料 | 第56页 |
| ·血细胞的分离及血浆(无血细胞血淋巴)的制备 | 第56-57页 |
| ·试剂和仪器 | 第57页 |
| 2.方法 | 第57-61页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第57页 |
| ·WSSV感染的PCR检测方法验证 | 第57页 |
| ·cDNA文库的构建及总RNA的提取、检测 | 第57-58页 |
| ·cDNA的合成 | 第58-59页 |
| ·测序结果的序列分析 | 第59页 |
| ·四种蛋白酶抑制因子的同源比较及进化树分析 | 第59页 |
| ·四种蛋白酶抑制因子的组织分布 | 第59-60页 |
| ·刺激后的表达模式分析 | 第60-61页 |
| 三、结果 | 第61-72页 |
| 1 WSSV感染的PCR检测 | 第61页 |
| 2 蛋白酶抑制因子序列的cDNA克隆 | 第61-66页 |
| 3 蛋白酶抑制因子的组织分布 | 第66-67页 |
| 4 同源比较及进化树分析 | 第67-70页 |
| 5 WSSV刺激后的表达模式 | 第70-72页 |
| 四、讨论 | 第72-74页 |
| 第三章 克氏原螯虾蛋白酶抑制因子hcPcSPI1功能研究 | 第74-93页 |
| 一、引言 | 第74-76页 |
| 二、材料与方法 | 第76-84页 |
| 1 材料 | 第76-77页 |
| ·小龙虾的购买及免疫刺激 | 第76页 |
| ·血细胞的分离及无血细胞血淋巴的制备 | 第76页 |
| ·主要试剂 | 第76-77页 |
| 2 方法 | 第77-84页 |
| ·总RNA的提取、cDNA的制备及组织蛋白的制备 | 第77页 |
| ·细菌刺激后RNA水平的表达模式分析 | 第77页 |
| ·hcPcSPI1成熟肽和单结构域的原核表达及纯化 | 第77-81页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第81页 |
| ·Western blot法检测免疫家兔血清内抗体 | 第81-82页 |
| ·蛋白水平的组织分布及表达模式分析 | 第82页 |
| ·蛋白酶活性抑制实验 | 第82-83页 |
| ·hcPcSPI1酶抑制动力学实验 | 第83-84页 |
| ·微生物结合实验 | 第84页 |
| ·细菌生长活性抑制实验 | 第84页 |
| 三、结果 | 第84-91页 |
| 1 同源性比较 | 第84-85页 |
| 2 重组表达及纯化 | 第85-86页 |
| 3 蛋白水平的组织分布及大肠杆菌刺激表达模式分析 | 第86页 |
| 4 蛋白酶抑制实验 | 第86-87页 |
| 5 酶抑制动力学实验 | 第87-90页 |
| 6 细菌结合实验 | 第90页 |
| 7 细菌生长抑制实验 | 第90-91页 |
| 四、讨论 | 第91-93页 |
| 第四章 抑制因子hcPcSPI2表达模式分析与功能分析 | 第93-104页 |
| 一、引言 | 第93-94页 |
| 二、材料与方法 | 第94-97页 |
| 1 材料 | 第94-95页 |
| ·实验材料 | 第94页 |
| ·试剂 | 第94-95页 |
| 2 方法 | 第95-97页 |
| ·相似性比较 | 第95页 |
| ·RNA的提取及cDNA的合成 | 第95页 |
| ·原核表达、纯化及抗体的制备 | 第95页 |
| ·hcPcSPI2血细胞型分布及组织分布 | 第95-96页 |
| ·表达模式分析 | 第96页 |
| ·蛋白酶抑制实验 | 第96-97页 |
| ·蛋白酶抑制动力学实验 | 第97页 |
| ·细菌生长抑制实验 | 第97页 |
| 三、结果 | 第97-101页 |
| 1 相似性比较 | 第97页 |
| 2 原核表达、纯化及相应抗体的制备 | 第97-99页 |
| 3 hcPcSPI2血细胞型及组织分布 | 第99页 |
| 4 表达模式分析 | 第99-100页 |
| 5 蛋白酶抑制实验 | 第100-101页 |
| 6 蛋白酶抑制动力学实验 | 第101页 |
| 7 细菌生长抑制实验 | 第101页 |
| 四、讨论 | 第101-104页 |
| 总结与创新点 | 第104-105页 |
| 参考文献 | 第105-119页 |
| 致谢 | 第119-120页 |
| 在读博士期间发表文章 | 第120-121页 |
| 外文文章 | 第121-141页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第141页 |
