| 目录 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 缩略词(Abbreviation) | 第11-13页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-25页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌的病原学 | 第13-14页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌的历史及分类地位 | 第13页 |
| ·膜肺炎放线杆菌的生物学特性 | 第13-14页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌的毒力因子 | 第14-20页 |
| ·荚膜多糖 | 第14-15页 |
| ·脂多糖 | 第15-16页 |
| ·溶血外毒素(Actinobacillus pleuropneumoniae-RTX-toxins,Apx) | 第16-18页 |
| ·外膜蛋白(outer membrane proteins,OMP) | 第18-19页 |
| ·转铁结合蛋白(transferring binding proteins,tbd) | 第19-20页 |
| ·酶类 | 第20页 |
| ·黏附素 | 第20页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎的诊断 | 第20-23页 |
| ·细菌分离鉴定 | 第20-21页 |
| ·血清学鉴定 | 第21-22页 |
| ·分子生物学技术 | 第22-23页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎的免疫预防 | 第23-25页 |
| ·全菌灭活疫苗 | 第23页 |
| ·亚单位疫苗 | 第23-24页 |
| ·弱毒疫苗 | 第24页 |
| ·ghosts疫苗 | 第24页 |
| ·口服疫苗 | 第24-25页 |
| 第2章 表达毒素ApxⅠA、ApxⅡA的重组胸膜肺炎放线杆菌的构建及生物学特性研究 | 第25-45页 |
| ·研究目的及意义 | 第25页 |
| ·实验材料 | 第25-30页 |
| ·细菌菌株 | 第25页 |
| ·载体与质粒 | 第25-26页 |
| ·主要药品及试剂 | 第26-27页 |
| ·主要培养基和抗生素 | 第27-28页 |
| ·本研究中所用的寡核苷酸引物 | 第28页 |
| ·缓冲液 | 第28-29页 |
| ·细菌基因组DNA提取试剂 | 第29页 |
| ·其它缓冲液及试剂 | 第29页 |
| ·实验动物 | 第29-30页 |
| ·实验方法 | 第30-34页 |
| ·细菌活化 | 第30页 |
| ·细菌(APP)基因组DNA提取 | 第30页 |
| ·PCR或酶切产物的回收与纯化 | 第30页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第30-31页 |
| ·连接产物的转化 | 第31页 |
| ·重组质粒的快速鉴定 | 第31-32页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第32页 |
| ·质粒的小量制备(改良的碱裂解法) | 第32页 |
| ·质粒的大量制备(碱裂解法) | 第32-33页 |
| ·Western blotting | 第33页 |
| ·基因工程重组菌株apxⅡC~-╱apxⅠA~+生物学特性的研究 | 第33-34页 |
| ·结果与分析 | 第34-41页 |
| ·apxⅠA基因的PCR扩增 | 第34-35页 |
| ·重组穿梭质粒pJFF-IA的构建 | 第35-36页 |
| ·重组穿梭质粒pJFF-IA电转化及基因工程重组菌株apxⅡC~-/apxⅠA~+的筛选 | 第36页 |
| ·重组穿梭质粒pJFF-IA的遗传稳定性分析 | 第36-37页 |
| ·ApxⅠA基因在基因工程突变株HBC~-/GFP~+中表达特性研究 | 第37-38页 |
| ·重组菌株生长特性研究 | 第38页 |
| ·重组菌株apxⅡC~-/apxⅠA~+对断奶仔猪的免疫效力试验 | 第38-41页 |
| ·讨论 | 第41-45页 |
| ·穿梭质粒pJFF_NX的选择 | 第42页 |
| ·ApxⅠA的选择及克隆 | 第42-43页 |
| ·亲本菌株及攻毒菌株的选择 | 第43-44页 |
| ·基因工程重组菌株免疫的仔猪对APP攻击的免疫抵抗 | 第44-45页 |
| 第3章 猪传染性胸膜肺炎间接TonB2-ELISA方法的建立及初步应用 | 第45-57页 |
| ·研究目的及意义 | 第45-46页 |
| ·实验材料 | 第46-47页 |
| ·菌种、质粒和所用的寡核苷酸引物 | 第46-47页 |
| ·酶及主要生物学试剂 | 第47页 |
| ·血清、酶标抗体、血清样品和对比试剂盒 | 第47页 |
| ·实验方法 | 第47-49页 |
| ·重组表达质粒pKG-tonB2的构建 | 第47页 |
| ·重组表达质粒pKG-tonB2在大肠杆菌中的表达 | 第47-48页 |
| ·TonB2-ELISA方法的建立 | 第48-49页 |
| ·结果与分析 | 第49-54页 |
| ·tonB2基因的克隆及表达 | 第49-51页 |
| ·TonB2-ELISA方法的建立 | 第51-54页 |
| ·TonB2-ELISA与IHA的比较及应用 | 第54页 |
| ·讨论 | 第54-57页 |
| ·ELISA检测方法的选择 | 第54-55页 |
| ·最佳抗原包被浓度及血清稀释度的选择 | 第55页 |
| ·TonB2蛋白的特异性 | 第55-56页 |
| ·TonB2-ELISA的敏感性 | 第56页 |
| ·TonB2-ELISA的临床应用 | 第56-57页 |
| 第4章 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
