本地毛形线虫49ku ES重组蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-12页 |
| 1 引言 | 第12-22页 |
| ·研究的目的和意义 | 第12页 |
| ·旋毛虫抗原的研究进展 | 第12-14页 |
| ·虫体抗原 | 第13页 |
| ·表面抗原 | 第13页 |
| ·ES抗原 | 第13-14页 |
| ·ES抗原在旋毛虫病诊断及预防方面的研究进展 | 第14-16页 |
| ·ES抗原在旋毛虫病诊断方面的应用 | 第14-15页 |
| ·ES抗原的免疫保护作用 | 第15-16页 |
| ·ES抗原基因的克隆及表达 | 第16页 |
| ·旋毛虫检测方法的研究进展 | 第16-22页 |
| ·活组织压片镜检法 | 第17页 |
| ·人工消化分离虫体法 | 第17页 |
| ·免疫诊断 | 第17-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-35页 |
| ·材料 | 第22-26页 |
| ·制备49ku ES重组蛋白材料 | 第22-23页 |
| ·McAb的制备和鉴定材料 | 第23-25页 |
| ·McAb鉴定材料 | 第25页 |
| ·主要仪器器材 | 第25-26页 |
| ·重组蛋白制备方法 | 第26-28页 |
| ·重组表达菌的诱导表达 | 第26页 |
| ·重组表达菌SDS-PAGE分析 | 第26-27页 |
| ·亲和层析纯化重组蛋白 | 第27-28页 |
| ·ES抗原制备方法 | 第28页 |
| ·重组蛋白浓度测定 | 第28页 |
| ·McAb制备方法 | 第28-30页 |
| ·小鼠免疫 | 第28页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第28页 |
| ·筛选方法的建立 | 第28-30页 |
| ·杂交瘤细胞株的建立 | 第30-31页 |
| ·饲养层细胞的制备 | 第30页 |
| ·SP2/0细胞的准备 | 第30页 |
| ·脾细胞的制备 | 第30页 |
| ·融合方法 | 第30-31页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第31页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的克隆 | 第31页 |
| ·细胞的冻存与复苏 | 第31页 |
| ·细胞的冻存 | 第31页 |
| ·细胞的复苏 | 第31页 |
| ·McAb的大量制备 | 第31-32页 |
| ·体外培养法 | 第31-32页 |
| ·体内诱生腹水法 | 第32页 |
| ·McAb鉴定方法 | 第32-35页 |
| ·杂交瘤细胞上清中单抗效价的测定 | 第32页 |
| ·杂交瘤细胞腹水中单抗效价的测定 | 第32页 |
| ·McAb亚类鉴定 | 第32-33页 |
| ·杂交瘤细胞分泌McAb稳定性测定 | 第33页 |
| ·Dot-ELISA试验 | 第33页 |
| ·Western blot试验 | 第33-34页 |
| ·单克隆抗体交叉反应 | 第34-35页 |
| 3 试验结果 | 第35-45页 |
| ·重组蛋白制备与纯化 | 第35-36页 |
| ·重组菌的诱导表达与SDS-PAGE分析 | 第35页 |
| ·纯化的重组蛋白的SDS-PAGE分析 | 第35-36页 |
| ·纯化的重组蛋白浓度的测定 | 第36页 |
| ·ES抗原制备 | 第36-37页 |
| ·天然ES抗原的SDS-PAGE分析 | 第36页 |
| ·天然ES抗原浓度的测定 | 第36-37页 |
| ·筛选方法的建立 | 第37-40页 |
| ·包被抗原、抗体最佳工作浓度的确定 | 第37页 |
| ·血清稀释液的选择 | 第37-38页 |
| ·酶标二抗作用时间的确定 | 第38页 |
| ·底物作用时间的确定 | 第38页 |
| ·阴阳性临界值的确定 | 第38-40页 |
| ·McAb的制备与鉴定 | 第40-45页 |
| ·杂交瘤细胞株的建立 | 第40-41页 |
| ·McAb的鉴定 | 第41-45页 |
| 4 讨论 | 第45-49页 |
| ·实验动物的挑选和免疫 | 第45页 |
| ·细胞融合 | 第45页 |
| ·杂交瘤细胞的筛选与克隆 | 第45-46页 |
| ·细胞的冻存与复苏 | 第46页 |
| ·污染的预防和排除 | 第46-47页 |
| ·关于抗49ku ES重组蛋白的McAb | 第47-49页 |
| 5 结论 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-56页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第56页 |
