| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 论文中缩写说明表 | 第8-9页 |
| 1 前言 | 第9-23页 |
| ·玉米细胞质雄性不育研究进展 | 第9-14页 |
| ·玉米细胞质雄性不育系的胞质分类 | 第9-10页 |
| ·与育性相关的mtDNA可读框(ORF) | 第10-11页 |
| ·玉米CMS-S核基因的遗传 | 第11-13页 |
| ·育性相关核基因的克隆及雄性不育性恢复机理的假说 | 第13-14页 |
| ·RNA解旋酶的研究进展 | 第14-19页 |
| ·RNA解旋酶的分类 | 第14-16页 |
| ·DEAD-box RNA解旋酶 | 第16-18页 |
| ·植物中DEAD-box RNA解旋酶的研究进展 | 第18页 |
| ·玉米中DEAD-box RNA解旋酶的研究进展 | 第18-19页 |
| ·细菌人工染色体(BAC)文库 | 第19-23页 |
| ·细菌人工染色体(BAC)的发展概述 | 第19-20页 |
| ·BAC载体的构建机理 | 第20页 |
| ·BAC载体的优点 | 第20-21页 |
| ·BAC文库的构建及其应用 | 第21-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-32页 |
| ·植物材料 | 第23页 |
| ·011-D17片段的PCR扩增 | 第23-25页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第23页 |
| ·PCR扩增 | 第23-24页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第24页 |
| ·PCR产物和T-载体连接 | 第24页 |
| ·电转化(以下操作均在无菌环境下进行) | 第24-25页 |
| ·全长cDNA的扩增和克隆 | 第25-26页 |
| ·玉米花粉的分离和RNA的抽提 | 第25页 |
| ·5′-RACE | 第25-26页 |
| ·生物信息学分析 | 第26页 |
| ·RT-PCR分析 | 第26-28页 |
| ·总RNA抽提 | 第26-27页 |
| ·反转录反应 | 第27页 |
| ·利用特异引物进行PCR扩增 | 第27-28页 |
| ·BAC文库的筛选 | 第28-32页 |
| ·BAC文库的转移 | 第28-29页 |
| ·BAC文库阳性克隆筛选 | 第29页 |
| ·BAC克隆片段的提取 | 第29-30页 |
| ·亚克隆的筛选 | 第30页 |
| ·亚克隆测序 | 第30-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-41页 |
| ·011-D17 cDNA片段克隆 | 第32-33页 |
| ·011-D17 cDNA片段的PCR扩增 | 第32页 |
| ·011-D17克隆序列分析 | 第32-33页 |
| ·ZmRH2基因全长cDNA的克隆和序列分析 | 第33-37页 |
| ·花粉RNA的提取 | 第33页 |
| ·5′-RACE结果 | 第33页 |
| ·ZmRH2基因全长cDNA序列分析 | 第33-36页 |
| ·ZmRH2同其它物种的DEAD-box RNA解旋酶的序列比较 | 第36-37页 |
| ·ZmRH2基因的表达分析 | 第37-38页 |
| ·玉米各个组织总RNA的提取 | 第37-38页 |
| ·RT-PCR验证 | 第38页 |
| ·BAC文库的筛选结果 | 第38-41页 |
| ·对BAC文库的初步筛选 | 第38-39页 |
| ·对阳性克隆的进一步筛选 | 第39-40页 |
| ·亚克隆的测序 | 第40-41页 |
| 4.讨论 | 第41-45页 |
| ·ZmRH2基因在BAC文库筛选中的问题 | 第41页 |
| ·RACE技术在ZmRH2基因全长cDNA克隆中的应用 | 第41-42页 |
| ·ZmRH2基因预测方法 | 第42-43页 |
| ·ZmRH2基因序列分析 | 第43-44页 |
| ·ZmRH2基因表达分析 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 附录1 小样法提取质粒 | 第53页 |
| 附录2 CASpure Gel Extraction Kit纯化回收DNA | 第53-54页 |
| 附录3 电转化感受态的制备 | 第54页 |
| 附录4 总RNA的提取 | 第54-55页 |
| 附录5 5′-Full RACE Core Set Kit操作说明 | 第55-56页 |
