| 致谢 | 第1-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目次 | 第8-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-25页 |
| ·酶标记物概述 | 第11页 |
| ·标记酶应用 | 第11-14页 |
| ·辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase) | 第12页 |
| ·荧光素酶(luciferase) | 第12-13页 |
| ·碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,AP) | 第13-14页 |
| ·研究现状 | 第14-23页 |
| ·碱性磷酸酶研究状况 | 第15-19页 |
| ·链亲和素研究状况 | 第19-23页 |
| ·本研究内容及意义 | 第23-25页 |
| ·研究目的及意义 | 第23-24页 |
| ·本研究内容 | 第24页 |
| ·本研究技术路线 | 第24-25页 |
| 第二章.碱性磷酸酶的表达与鉴定 | 第25-44页 |
| ·实验材料 | 第25-29页 |
| ·菌种与质粒 | 第25页 |
| ·实验试剂 | 第25-26页 |
| ·培养基与溶液 | 第26-28页 |
| ·实验仪器 | 第28-29页 |
| ·实验方法 | 第29-38页 |
| ·目的基因获得以及克隆载体构建 | 第29-33页 |
| ·目的基因定点突变与克隆载体 | 第33-36页 |
| ·重组表达载体和表达菌株构建 | 第36-37页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第37-38页 |
| ·表达产物SDS-PAGE电泳分析 | 第38页 |
| ·重组碱性磷酸酶酶活鉴定 | 第38页 |
| ·结果与分析 | 第38-43页 |
| ·目的基因两端添加酶切序列 | 第38-39页 |
| ·目的基因连接克隆质粒鉴定 | 第39-40页 |
| ·目的基因连接表达质粒以及表达鉴定 | 第40-43页 |
| ·重组碱性磷酸酶酶活鉴定 | 第43页 |
| ·小结 | 第43-44页 |
| 第三章 链亲和素表达与鉴定 | 第44-60页 |
| ·实验材料 | 第44-46页 |
| ·菌种与质粒 | 第44页 |
| ·实验试剂 | 第44页 |
| ·实验培养基与溶液 | 第44-46页 |
| ·实验仪器 | 第46页 |
| ·实验方法 | 第46-50页 |
| ·目的基因获得与合成 | 第46-47页 |
| ·重组载体的构建 | 第47页 |
| ·重组链亲和素表达菌株诱导表达 | 第47页 |
| ·重组链亲和素表达蛋白纯化 | 第47-50页 |
| ·链亲和素活性测定 | 第50页 |
| ·实验结果与分析 | 第50-59页 |
| ·链亲和素表达菌株构建 | 第50-52页 |
| ·重组蛋白表达及纯化 | 第52-54页 |
| ·重组蛋白酶活鉴定 | 第54-59页 |
| ·小结 | 第59-60页 |
| 第四章 融合蛋白的表达与鉴定 | 第60-71页 |
| ·实验材料 | 第60-61页 |
| ·质粒与菌株 | 第60页 |
| ·主要实验试剂 | 第60页 |
| ·实验所需溶液 | 第60页 |
| ·实验仪器 | 第60-61页 |
| ·实验方法 | 第61-64页 |
| ·pET24a-EAP-SA表达体系构建 | 第61-62页 |
| ·pET24a-SA-EAP表达体系构建 | 第62-63页 |
| ·融合蛋白表达 | 第63页 |
| ·融合蛋白复性 | 第63-64页 |
| ·融合蛋白酶活测定 | 第64页 |
| ·实验结果 | 第64-70页 |
| ·pET24a-SA-EAP克隆质粒鉴定 | 第64-65页 |
| ·重组表达质粒鉴定 | 第65-67页 |
| ·蛋白表达鉴定 | 第67-69页 |
| ·酶活鉴定 | 第69-70页 |
| ·讨论与分析 | 第70-71页 |
| 第五章 结论与展望 | 第71-73页 |
| ·结论 | 第71页 |
| ·论文的创新与意义 | 第71-72页 |
| ·展望 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-82页 |
| 作者简历及所取得的科研成果 | 第82页 |