| 致谢 | 第1-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目次 | 第8-11页 |
| 1 绪论 | 第11-21页 |
| ·酯酶 | 第11-14页 |
| ·酯酶概述 | 第11页 |
| ·酯酶的结构特征 | 第11-12页 |
| ·酯酶的应用 | 第12-14页 |
| ·宏基因组 | 第14-18页 |
| ·宏基因组的概述 | 第14-16页 |
| ·宏基因组文库的构建及其应用 | 第16-17页 |
| ·宏基因组学的应用 | 第17-18页 |
| ·课题目标及主要研究内容 | 第18-21页 |
| 2 宏基因文库的构建 | 第21-32页 |
| ·引言 | 第21页 |
| ·材料与方法 | 第21-26页 |
| ·试剂与器材 | 第21-22页 |
| ·实验方法 | 第22-26页 |
| ·结果与分析 | 第26-30页 |
| ·土壤宏基因组DNA的提取及文库构建 | 第26-27页 |
| ·活性筛选及亚克隆的构建 | 第27-28页 |
| ·亚克隆产酯酶菌株的筛选 | 第28-29页 |
| ·序列分析 | 第29-30页 |
| ·小结 | 第30-32页 |
| 3 酯酶基因的克隆与表达载体的构建 | 第32-46页 |
| ·引言 | 第32页 |
| ·材料与方法 | 第32-41页 |
| ·菌种与质粒 | 第32页 |
| ·试剂与器材 | 第32-34页 |
| ·实验方法 | 第34-41页 |
| ·结果与分析 | 第41-44页 |
| ·酯酶EstC28-1基因的扩增 | 第41页 |
| ·重组质粒pET 21a-EstC28-1双酶切的鉴定 | 第41-42页 |
| ·重组质粒pPIC9K-EstC28-1双酶切的鉴定 | 第42-43页 |
| ·毕赤酵母重组子pPIC9K-EstC28-1的底物筛选 | 第43-44页 |
| ·小结 | 第44-46页 |
| 4 蛋白的诱导表达与纯化 | 第46-54页 |
| ·引言 | 第46页 |
| ·材料与方法 | 第46-50页 |
| ·试剂与器材 | 第46-47页 |
| ·实验方法 | 第47-50页 |
| ·结果与分析 | 第50-53页 |
| ·原核蛋白诱导表达条件的优化 | 第50页 |
| ·毕赤酵母中蛋白的诱导表达 | 第50-51页 |
| ·凝胶过滤层析 | 第51-52页 |
| ·蛋白表达量分析 | 第52-53页 |
| ·小结 | 第53-54页 |
| 5 酯酶酶学性质的表征 | 第54-63页 |
| ·引言 | 第54页 |
| ·材料与方法 | 第54-56页 |
| ·试剂与仪器 | 第54-55页 |
| ·实验方法 | 第55-56页 |
| ·结果与分析 | 第56-62页 |
| ·不同pH值对酯酶EstC28-1活性和稳定性的影响 | 第56-57页 |
| ·不同温度对酯酶EstC28-1活性和稳定性的影响 | 第57-58页 |
| ·酯酶EstC28-1的热稳定性 | 第58页 |
| ·有机溶剂对酯酶EstC28-1的活性影响 | 第58-60页 |
| ·金属离子对酯酶EstC28-1的活性影响 | 第60-61页 |
| ·底物特异性 | 第61-62页 |
| ·小结 | 第62-63页 |
| 6 结论与展望 | 第63-66页 |
| ·结论 | 第63-64页 |
| ·论文的创新及意义 | 第64页 |
| ·展望 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-75页 |
| 附录 实验室常用试剂、缓冲液的配方 | 第75-78页 |
| 作者简历及在学期间所发表论文 | 第78页 |
