| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-38页 |
| 1. 国内外畜禽遗传资源现状 | 第14-16页 |
| ·世界畜禽遗传资源现状 | 第14-15页 |
| ·我国畜禽遗传资源现状 | 第15-16页 |
| 2. 细菌人工染色体(BAC)的发展及应用 | 第16-25页 |
| ·细菌人工染色体(BAC)的发展概述 | 第16-19页 |
| ·BAC 基因组文库的应用 | 第19-23页 |
| ·BAC转基因技术研究进展与应用 | 第23-24页 |
| ·已构建的基因组BAC文库 | 第24-25页 |
| 3. 转基因技术概况 | 第25-29页 |
| ·转基因方法概述 | 第26-28页 |
| ·利用转基因技术对我国地方鸡种优良性状的改良 | 第28-29页 |
| 4 畜禽遗传资源细胞库的建立及质量检测 | 第29-32页 |
| ·畜禽体细胞库的构建 | 第29-31页 |
| ·我国畜禽体细胞库的建立的优势 | 第31页 |
| ·细胞系质量检测标准 | 第31-32页 |
| 5. 我国特有地方畜禽品种五指山微型猪、北京油鸡优良、抗逆和抗病基因研究现状及预期分析 | 第32-38页 |
| ·五指山小型猪研究现状 | 第32-33页 |
| ·北京油鸡风味特性基因研究现状 | 第33-35页 |
| ·腺苷酸琥珀酸裂解酶(ADSL)基因的研究进展 | 第35-36页 |
| ·氨基咪唑氨甲酰核苷酸转甲酰基酶/次黄嘌呤核苷酸环水解酶(purH)基因的研究进展 | 第36-38页 |
| 第二章 五指山小型猪基因组BAC 文库的构建 | 第38-62页 |
| 1 材料 | 第38-40页 |
| ·主要药品和酶 | 第38页 |
| ·主要仪器 | 第38-39页 |
| ·常规试剂 | 第39-40页 |
| 2 五指山小型猪基因组 BAC 文库的构建 | 第40-50页 |
| ·样品，菌株与质粒 | 第40页 |
| ·试剂 | 第40-41页 |
| ·实验方法 | 第41-50页 |
| ·BAC 载体的制备 | 第41-43页 |
| ·碱裂解法大量提取 BAC 质粒 | 第43-44页 |
| ·CsCL-EtBr 密度梯度离心纯化得到的超螺旋质粒 | 第44页 |
| ·BAC 载体的后期处理(酶切和去磷酸化) | 第44-46页 |
| ·电转化感受态细胞DH lOB的制备 | 第46页 |
| ·琼脂糖包埋法制备基因组大片段 | 第46-47页 |
| ·预电泳、大片段基因组DNA 的部分酶切 | 第47-48页 |
| ·脉冲场电泳分离最适高分子量DNA 片段 | 第48-49页 |
| ·电洗脱回收基因组 | 第49页 |
| ·基因组DNA 和载体DNA 的连接与转化 | 第49-50页 |
| 3 BAC 文库的保存与鉴定 | 第50-52页 |
| ·单克隆分离和培养 | 第50页 |
| ·使用机械手分装菌液 | 第50-51页 |
| ·文库的鉴定 | 第51-52页 |
| 4 实验结果 | 第52-56页 |
| ·BAC 载体的提取和纯化 | 第52页 |
| ·载体的酶切和去磷酸化 | 第52-53页 |
| ·高分子量基因组（HMW genome）DNA 的制备 | 第53页 |
| ·基因组DNA的部分酶切 | 第53-54页 |
| ·大片段DNA 的二次分离与电洗脱法回收酶切片段 | 第54-55页 |
| ·连接与条件条件的确定 | 第55-56页 |
| 5 讨论 | 第56-60页 |
| ·BAC载体制备技术 | 第56-57页 |
| ·高分子量DNA 的制备技术 | 第57-58页 |
| ·大片段DNA 的回收技术 | 第58页 |
| ·载体与高分子量DNA连接技术 | 第58-59页 |
| ·电激转化技术 | 第59页 |
| ·BAC文库的鉴定 | 第59-60页 |
| 6 小结 | 第60-62页 |
| 第三章 北京油鸡转基因靶细胞系的创建 | 第62-76页 |
| 1 材料和方法 | 第62-65页 |
| ·主要材料 | 第62页 |
| ·实验方法 | 第62-65页 |
| ·原代培养、传代、冻存和复苏 | 第62-63页 |
| ·细胞活力测定 | 第63页 |
| ·生长曲线 | 第63页 |
| ·细胞系的微生物检测 | 第63-64页 |
| ·染色体分析 | 第64页 |
| ·细胞系的同工酶酶谱分析 | 第64页 |
| ·脂质体介导的六种荧光蛋白基因在北京油鸡鸡胚成纤维细胞中的表达 | 第64-65页 |
| 2 结果与分析 | 第65-71页 |
| ·北京油鸡成纤维靶细胞形态学观察 | 第65-66页 |
| ·细胞生长的动态观察 | 第66页 |
| ·微生物污染检测结果 | 第66-67页 |
| ·染色体分析 | 第67-68页 |
| ·细胞系的同工酶酶谱分析 | 第68-69页 |
| ·脂质体介导的六种荧光蛋白基因转染北京油鸡胚成纤维细胞的检测结果 | 第69-71页 |
| 3 讨论 | 第71-74页 |
| ·北京油鸡转基因靶细胞系的创建 | 第71-72页 |
| ·核型分析 | 第72页 |
| ·细胞系种间污染 | 第72-74页 |
| ·外源基因在细胞中的表达 | 第74页 |
| 4 小结 | 第74-76页 |
| 第四章 北京油鸡 ADSL 基因的研究 | 第76-96页 |
| 1 材料与方法 | 第76-80页 |
| ·材料 | 第76-77页 |
| ·北京油鸡 | 第76-77页 |
| ·质粒与菌株 | 第77页 |
| ·主要试剂 | 第77页 |
| ·实验方法 | 第77-80页 |
| ·总 RNA 的抽提 | 第77页 |
| ·北京油鸡ADSL 基因cDNA 全序列的扩增与3′、5′RACE | 第77页 |
| ·引物设计与北京油鸡 ADSL 基因成熟肽片段的获得 | 第77-78页 |
| ·ADSL 基因5′侧翼调控区的研究 | 第78页 |
| ·北京油鸡ADSL 基因在体内的表达研究 | 第78页 |
| ·北京油鸡ADSL基因表达载体的构建 | 第78-79页 |
| ·重组北京油鸡ADSL的表达及SDS-PAGE分析 | 第79页 |
| ·重组北京油鸡GST-ADSL 融合蛋白的纯化 | 第79页 |
| ·Western-blotting 检测融合蛋白 | 第79页 |
| ·北京油鸡ADSL基因真核表达载体构建与脂质体介导转染成纤维细胞. | 第79-80页 |
| ·生物信息学分析 | 第80页 |
| 2 结果 | 第80-92页 |
| ·北京油鸡ADSL 全长cDNA 的克隆及序列测定 | 第80-81页 |
| ·5′侧翼调控区分析 | 第81-83页 |
| ·不同物种间 ADSL氨基酸序列比对分析 | 第83-84页 |
| ·北京油鸡ADSL基因组序列分析 | 第84-85页 |
| ·北京油鸡ADSL 基因体内表达情况 | 第85-86页 |
| ·融合表达载体pGEX-ADSL 的构建 | 第86-87页 |
| ·重组北京油鸡ADSL 的表达及SDS-PAGE | 第87-88页 |
| ·北京油鸡pGEX-ADSL 融合蛋白的可溶性检测及纯化 | 第88-89页 |
| ·Western blot检测重组融合蛋白 | 第89-90页 |
| ·ADSL 在转染细胞中的亚细胞定位 | 第90-91页 |
| ·北京油鸡ADSL 的三级结构分析 | 第91-92页 |
| 3. 讨论 | 第92-94页 |
| ·全长ADSL 基因cDNA 序列及其编码氨基酸序列分析 | 第92页 |
| ·ADSL 基因5′侧翼调控区的研究 | 第92-93页 |
| ·ADSL 基因功能分析 | 第93页 |
| ·ADSL 组织特异性表达 | 第93页 |
| ·pGEX-ADSL 融合蛋白的表达与活性鉴定 | 第93-94页 |
| ·pEGFP-N3-ADSL在细胞中的定位 | 第94页 |
| 4. 小结 | 第94-96页 |
| 第五章 北京油鸡purH 基因的研究 | 第96-114页 |
| 1 材料与方法 | 第97-99页 |
| ·材料 | 第97页 |
| ·北京油鸡 | 第97页 |
| ·质粒与菌株 | 第97页 |
| ·主要试剂 | 第97页 |
| ·实验方法 | 第97-99页 |
| ·总 RNA 的抽提 | 第97页 |
| ·北京油鸡purH 基因cDNA 全序列的扩增与3′、5′RACE | 第97-98页 |
| ·北京油鸡PURH 基因在体内的表达研究 | 第98页 |
| ·北京油鸡purH真核表达载体的构建 | 第98页 |
| ·脂质体介导法转染成纤维细胞及purH 基因的亚细胞分布 | 第98页 |
| ·G418北京油鸡成纤维细胞最小致死量测定与抗性细胞的筛选 | 第98-99页 |
| ·单克隆阳性细胞株荧光蛋白基因整合、表达的检测及鉴定 | 第99页 |
| ·purH在北京油鸡成纤维细胞中表达检测 | 第99页 |
| 2. 结果 | 第99-109页 |
| ·北京油鸡purH 基因序列分析 | 第99-100页 |
| ·北京油鸡purH 基因体内表达情况 | 第100-101页 |
| ·北京油鸡purH 基因组分析 | 第101-102页 |
| ·purH 真核表达载体的构建 | 第102-103页 |
| ·重组外源基因转染率的比较 | 第103-104页 |
| ·北京油鸡purH基因的亚细胞定位 | 第104-106页 |
| ·克隆化细胞株的筛选 | 第106-107页 |
| ·细胞凋亡的检测 | 第107-108页 |
| ·阳性细胞株的鉴定 | 第108页 |
| ·Western blot检测在北京油鸡成纤维细胞中表达的重组融合蛋白 | 第108-109页 |
| 3 讨论 | 第109-112页 |
| ·全长purH 基因cDNA 序列及其编码氨基酸序列分析 | 第109-110页 |
| ·影响转染表达的各种因素 | 第110页 |
| ·purH 在细胞中的定位 | 第110-111页 |
| ·北京油鸡成纤维细胞purH 阳性细胞株的建立 | 第111页 |
| ·北京油鸡成纤维细胞中表达的重组融合蛋白检测 | 第111-112页 |
| ·克隆化细胞的筛选与转基因动物克隆的应用 | 第112页 |
| 4 小结 | 第112-114页 |
| 总结 | 第114-116页 |
| 参考文献 | 第116-127页 |
| 附录：主要成果与发表相关论文 | 第127-129页 |
| 致谢 | 第129-131页 |
| 附录 | 第131-135页 |
