| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-12页 |
| 1 引言 | 第12-23页 |
| ·鸡球虫病的国内外研究概述 | 第12页 |
| ·鸡球虫疫苗的研究进展 | 第12-15页 |
| ·强毒苗 | 第12-13页 |
| ·弱毒苗 | 第13-15页 |
| ·亚单位疫苗 | 第15页 |
| ·球虫核酸疫苗的研究进展 | 第15-18页 |
| ·核酸疫苗的特点 | 第15-17页 |
| ·球虫核酸疫苗的研究 | 第17-18页 |
| ·球虫抗原基因的研究 | 第18-20页 |
| ·球虫抗原基因的筛选 | 第18页 |
| ·球虫抗原基因的研究 | 第18-20页 |
| ·核酸疫苗免疫效果的影响 | 第20-22页 |
| ·目的基因的选择 | 第20-21页 |
| ·载体的选择 | 第21页 |
| ·接种部位的预处理 | 第21页 |
| ·接种方法及途径 | 第21页 |
| ·接种剂量和次数 | 第21页 |
| ·佐剂的选择 | 第21-22页 |
| ·不同动物个体中免疫效果的差异 | 第22页 |
| ·核酸疫苗的应用前景 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-43页 |
| ·所需试剂和仪器 | 第23-26页 |
| ·裂殖子提取所需主要化学试剂 | 第23页 |
| ·总RNA 提取及反转录所需主要试剂 | 第23页 |
| ·ELISA 检测所需主要试剂 | 第23-24页 |
| ·SDS-PAGE 电泳所需主要试剂 | 第24页 |
| ·Wersten-blot 所需主要试剂 | 第24页 |
| ·蛋白纯化所需主要试剂 | 第24页 |
| ·质粒大量提取所用主要试剂 | 第24-25页 |
| ·主要仪器设备 | 第25-26页 |
| ·裂殖子总RNA 的提取与CDNA 的合成 | 第26-27页 |
| ·试验动物 | 第26页 |
| ·球虫继代增殖 | 第26页 |
| ·消化法提取裂殖子 | 第26页 |
| ·总RNA 的提取 | 第26-27页 |
| ·cDNA 的合成 | 第27页 |
| ·球虫裂殖子3-1E 基因的扩增与克隆 | 第27-31页 |
| ·引物设计与合成 | 第27页 |
| ·基因3-1E 的扩增 | 第27-28页 |
| ·DNA 片段的回收 | 第28-29页 |
| ·回收产物与PGM-T 载体的连接 | 第29页 |
| ·用氯化钙法制备感受态细胞 | 第29页 |
| ·转化 | 第29-30页 |
| ·克隆质粒的提取 | 第30页 |
| ·克隆质粒的鉴定 | 第30-31页 |
| ·原核表达载体的构建与表达 | 第31-34页 |
| ·引物的设计与合成 | 第31页 |
| ·目的基因的扩增 | 第31-32页 |
| ·PCR 回收产物与原核表达载体pET28a(+)的酶切 | 第32-33页 |
| ·酶切产物的连接与转化 | 第33页 |
| ·重组质粒pET28a-3-1E 的提取 | 第33页 |
| ·重组质粒pET28a-3-1E 的鉴定 | 第33-34页 |
| ·3-1E 基因的原核表达 | 第34页 |
| ·表达蛋白的鉴定 | 第34-38页 |
| ·表达蛋白的SDS-PAGE 检测 | 第34-35页 |
| ·表达蛋白的纯化 | 第35页 |
| ·抗原的制备 | 第35-36页 |
| ·动物免疫及抗体效价的测定 | 第36-37页 |
| ·表达产物的Western blot 检测 | 第37-38页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第38-40页 |
| ·真核表达载体和目的基因的酶切 | 第38页 |
| ·酶切产物的连接 | 第38页 |
| ·连接产物的转化 | 第38页 |
| ·重组质粒的提取 | 第38-39页 |
| ·重组质粒的PCR 鉴定 | 第39页 |
| ·重组质粒pcDNA3-3-1E 的测序 | 第39页 |
| ·重组质粒的的大量制备 | 第39-40页 |
| ·质粒DNA 浓度测定 | 第40页 |
| ·重组质粒在鸡体内表达情况的检测 | 第40页 |
| ·免疫保护试验 | 第40-43页 |
| ·试验分组 | 第40-41页 |
| ·免疫和称重 | 第41页 |
| ·攻虫 | 第41页 |
| ·抗球虫效果判定 | 第41-43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-53页 |
| ·球虫裂殖子提取结果 | 第43页 |
| ·总RNA 提取结果 | 第43页 |
| ·3-1E 基因PCR 扩增结果 | 第43-44页 |
| ·重组质粒的PCR 和酶切鉴定结果 | 第44-45页 |
| ·重组质粒的序列测定及同源性比较结果 | 第45页 |
| ·含有双酶切位点的引物扩增结果 | 第45-46页 |
| ·PET28A-3-1E 重组质粒的PCR 和双酶切鉴定结果 | 第46页 |
| ·3-1E 抗原蛋白SDS-PAGE 及WESTERN BLOT 结果 | 第46-48页 |
| ·3-1E 蛋白的SDS-PAGE 结果 | 第46-47页 |
| ·3-1E 蛋白纯化 | 第47页 |
| ·裂殖子抗原浓度测定结果 | 第47页 |
| ·免疫鼠血清效价测定结果 | 第47-48页 |
| ·抗原蛋白的Wersten blot 检测 | 第48页 |
| ·PCDNA3-3-1E 重组质粒的PCR 和酶切鉴定结果 | 第48-49页 |
| ·重组质粒插入基因的序列测定结果 | 第49页 |
| ·DNA 纯度和浓度测定结果 | 第49页 |
| ·目的基因在体内的表达情况的鉴定 | 第49-50页 |
| ·免疫保护试验结果 | 第50-53页 |
| ·增重影响 | 第50-51页 |
| ·卵囊计数 | 第51页 |
| ·肠道病变计分情况 | 第51-52页 |
| ·抗球虫指数综合效果评定 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-57页 |
| ·RNA 提取 | 第53页 |
| ·CDNA 第一链合成 | 第53-54页 |
| ·PCR 产物与克隆载体的连接 | 第54页 |
| ·目的基因与表达载体的连接 | 第54页 |
| ·裂殖子抗原的制备 | 第54页 |
| ·血清抗体效价检测 | 第54页 |
| ·DNA 疫苗的构建与表达 | 第54-55页 |
| ·DNA 疫苗免疫试验 | 第55-57页 |
| 5 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-66页 |
| 附录A 主要试剂的配制 | 第66-68页 |
| 附录B 载体图谱 | 第68-70页 |
| 附录C 碱基序列分析 | 第70-73页 |
| 附录D 基因测序图 | 第73-75页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第75-76页 |
| 作者简历 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
