| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 第一章 引言 | 第8-10页 |
| 一、研究背景和立题依据 | 第8-9页 |
| 二、本文的研究内容和意义 | 第9-10页 |
| 第二章 文献综述 | 第10-31页 |
| 第三章 材料与方法 | 第31-46页 |
| 一、实验材料 | 第31-32页 |
| （一） 细胞和质粒 | 第31页 |
| （二） 主要试剂 | 第31页 |
| （三） 主要仪器 | 第31-32页 |
| 二、实验方法 | 第32-46页 |
| （一） 哺乳动物细胞培养 | 第32页 |
| （二） 哺乳动物细胞总RNA 的提取 | 第32页 |
| （三） 逆转录PCR (RT-PCR) | 第32-34页 |
| （四） 人碱性成纤维细胞因子基因的克隆 | 第34-37页 |
| （五） 人碱性成纤维细胞生长因子的真核表达载体pCI-bFGF(+/-)的构建 | 第37页 |
| （六） 大提质粒 | 第37-39页 |
| （七） 哺乳动物细胞转染 | 第39-40页 |
| （八） 哺乳动物细胞基因组的提取及PCR | 第40-41页 |
| （九） 酶联免疫吸附实验 | 第41-42页 |
| （十） SDS-PAGE电泳及Western Blotting | 第42-44页 |
| （十一） 免疫荧光实验 | 第44-45页 |
| （十二） 流式细胞术 | 第45页 |
| （十三） MTT | 第45-46页 |
| 第四章 实验结果与分析 | 第46-66页 |
| 一、含人碱性成纤维细胞生长因子基因的真核表达载体的构建 | 第46-50页 |
| 二、转染方法的确定 | 第50-52页 |
| 三、稳定转染bFGF 的细胞株的获得 | 第52-56页 |
| （一） 质粒的制备及电穿孔转染与筛选 | 第52-54页 |
| （二） 阳性细胞克隆的鉴定 | 第54-56页 |
| 四、外源bFGF 基因的转染对细胞内源bFGF 表达的影响 | 第56-59页 |
| （一） 外源bFGF 基因的转染对内源的bFGF 的mRNA 表达的影响 | 第56-57页 |
| （二） 外源bFGF 基因的转染对细胞bFGF 蛋白表达水平的影响 | 第57-59页 |
| 五、bFGF 基因的转染对细胞增殖的影响 | 第59-60页 |
| 六、外源bFGF 基因的转染改变内源的bFGF 的表达对血管生成素的影响 | 第60-64页 |
| （一） 内源bFGF 表达水平改变对细胞内血管生成素mRNA 表达的影响 | 第60-61页 |
| （二） 内源bFGF 表达水平改变对细胞血管生成素蛋白表达的影响 | 第61-64页 |
| 七、外源血管生成素对转染bFGF 细胞的细胞增殖的影响 | 第64-66页 |
| 第五章 讨论 | 第66-70页 |
| 一、人碱性成纤维细胞生长因子真核表达载体的构建 | 第66页 |
| 二、外源bFGF 基因的转入对细胞内源bFGF 表达的影响 | 第66-68页 |
| （一） 稳定转染细胞系的建立 | 第66-67页 |
| （二） 外源 bFGF 基因的转染影响细胞内源 bFGF 的表达 | 第67-68页 |
| 三、bFGF 对 HeLa 细胞的增殖具有促进作用 | 第68页 |
| 四、内源的bFGF 表达水平在转录后水平负性地影响血管生成素的表达 | 第68-69页 |
| 五、外源血管生成素对转染bFGF 基因的细胞的增殖的影响 | 第69-70页 |
| 结论 | 第70-71页 |
| 创新点 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-87页 |
| 附录 英文缩写词 | 第87-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 作者简介 | 第90-91页 |
| 在学期间公开发表论文及著作情况 | 第91-92页 |
| 在读期间参加科研项目情况 | 第92页 |
