苹果酸脱氢酶及异柠檬酸脱氢酶扩增对E.coli产琥珀酸的影响
| 中文摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第7-23页 |
| ·琥珀酸的理化性质及用途 | 第7-11页 |
| ·琥珀酸的理化性质 | 第7-8页 |
| ·琥珀酸的用途 | 第8-9页 |
| ·琥珀酸衍生物的用途 | 第9-11页 |
| ·化学合成法生产琥珀酸 | 第11-12页 |
| ·生物法生产琥珀酸 | 第12-13页 |
| ·产琥珀酸微生物的分类 | 第13-15页 |
| ·主要琥珀酸产生菌代谢途径 | 第15-17页 |
| ·产琥珀酸放线杆菌 | 第16-17页 |
| ·产琥珀酸厌氧螺菌 | 第17页 |
| ·以大肠杆菌为基础的琥珀酸发酵研究的背景和优势 | 第17-22页 |
| ·大肠杆菌的代谢途径 | 第17-19页 |
| ·大肠杆菌产琥珀酸途径改造的国内外研究进展 | 第19-22页 |
| ·实验可行性分析 | 第22-23页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第23-40页 |
| ·实验仪器及设备 | 第23-24页 |
| ·实验药品及试剂的配置 | 第24-28页 |
| ·实验药品及试剂 | 第24-25页 |
| ·实验试剂的配置 | 第25-28页 |
| ·菌种和质粒 | 第28页 |
| ·实验方法 | 第28-40页 |
| ·菌体的培养 | 第28页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第28-29页 |
| ·质粒的提取 | 第29-31页 |
| ·大肠杆菌染色体DNA 的提取 | 第31-32页 |
| ·PCR 片段的回收和纯化 | 第32页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第32页 |
| ·琼脂糖凝胶DNA 片段的回收和纯化 | 第32-33页 |
| ·目的片段的PCR 扩增 | 第33-34页 |
| ·目的基因的酶切与连接 | 第34-35页 |
| ·α互补实验 | 第35-36页 |
| ·线状质粒DNA 的去磷酸化 | 第36-37页 |
| ·发酵实验操作 | 第37-38页 |
| ·内标法测定样品含量 | 第38-40页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第40-60页 |
| ·pET28a(+)质粒载体的提取 | 第40-41页 |
| ·pIFmdh 质粒的构建 | 第41-46页 |
| ·mdh 基因的PCR 扩增 | 第41-42页 |
| ·质粒pIFmdh 的构建 | 第42-44页 |
| ·质粒pIFmdh 的检验 | 第44-46页 |
| ·pIFicd质粒的构建 | 第46-50页 |
| ·icd 基因的PCR 扩增 | 第46-47页 |
| ·pIFicd 质粒载体的构建 | 第47-49页 |
| ·pIFicd 质粒载体的检验 | 第49-50页 |
| ·重组菌株 TUC1 和 TUC2 发酵特性研究 | 第50-54页 |
| ·重组菌有氧条件下的发酵 | 第50-52页 |
| ·厌氧条件下发酵特性研究 | 第52-54页 |
| ·重组菌发酵产物的测定 | 第54-60页 |
| ·内标法色谱测定 | 第54-56页 |
| ·TUC1 和TUC2 发酵产物的色谱检测 | 第56-60页 |
| 第四章 结论与展望 | 第60-61页 |
| ·结论 | 第60页 |
| ·展望 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
