| 中文摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-12页 |
| 第一部分 文献综述及选题目的和意义 | 第12-18页 |
| 第一章 疱疹病毒UL30基因及其编码蛋白研究进展 | 第12-18页 |
| 第二部分 试验研究 | 第18-62页 |
| 第二章 瘟病毒UL30基因序列特征分析 | 第18-28页 |
| 1.材料与方法 | 第18-19页 |
| ·材料 | 第18页 |
| ·生物信息学分析 | 第18-19页 |
| 2.结果 | 第19-25页 |
| ·ORF(Open Reading Frame)预测 | 第19页 |
| ·采用NCBI的BLASTP对该3621bp的ORF进行分析 | 第19页 |
| ·ORF3621的氨基酸翻译和蛋白质组分分析 | 第19-20页 |
| ·信号肽切割位点预测 | 第20-21页 |
| ·疏水性分析结果 | 第21-22页 |
| ·抗原性分析结果 | 第22页 |
| ·跨膜区预测结果 | 第22-23页 |
| ·磷酸化位点预测结果 | 第23页 |
| ·二级结构预测 | 第23-24页 |
| ·细胞定位结果 | 第24页 |
| ·系统进化树分析 | 第24-25页 |
| 3.讨论 | 第25-28页 |
| 第三章 鸭瘟病毒UL30基因克隆表达及多克隆抗体的制备 | 第28-48页 |
| 1.材料 | 第28-31页 |
| ·菌株/载体 | 第28页 |
| ·实验动物 | 第28页 |
| ·主要试剂及配制 | 第28-30页 |
| ·主要仪器设备 | 第30页 |
| ·其它 | 第30-31页 |
| 2.实验方法 | 第31-39页 |
| ·PCR扩增鸭瘟病毒CHv株UL30基因 | 第31-32页 |
| ·UL30基因的T-载体克隆与鉴定 | 第32页 |
| ·表达载体的构建 | 第32-35页 |
| ·重组蛋白的诱导表达及条件优化 | 第35-36页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第36-37页 |
| ·兔高免血清的制备 | 第37-38页 |
| ·兔抗UL30 IgG的纯化及鉴定 | 第38-39页 |
| 3.结果 | 第39-45页 |
| ·鸭瘟病毒UL30基因的扩增 | 第39页 |
| ·UL30—pMD18—Tsimple克隆质粒鉴定 | 第39-40页 |
| ·表达重组质粒的酶切鉴定 | 第40页 |
| ·基因诱导条件优化 | 第40-44页 |
| ·UL30基因诱导表达时间的确定 | 第40-42页 |
| ·UL30基因诱导剂IPTG浓度的确定 | 第42页 |
| ·UL30基因不同温度诱导 | 第42页 |
| ·UL30基因融合表达蛋白的可溶性分析和纯化 | 第42-44页 |
| ·Wsetern Blot结果 | 第44页 |
| ·兔抗UL30 IgG的纯化及SDS-PAGE鉴定 | 第44-45页 |
| 4.讨论 | 第45-48页 |
| ·UL30基因的克隆 | 第45-46页 |
| ·表达载体的选择 | 第46页 |
| ·诱导条件的优化 | 第46-47页 |
| ·包涵体的形成 | 第47页 |
| ·抗血清的制备 | 第47-48页 |
| 第四章 鸭瘟病毒UL30表达产物在宿主细胞中的细胞定位及表达时相分析 | 第48-62页 |
| 1.材料 | 第48-49页 |
| ·毒株/细胞 | 第48页 |
| ·主要试剂及配制 | 第48-49页 |
| ·主要仪器设备 | 第49页 |
| 2.实验方法 | 第49-52页 |
| ·间接免疫荧光检测DPV UL30在宿主细胞中定位方法的建立及优化 | 第49-50页 |
| ·DPV UL30基因产物细胞定位的动态监测 | 第50-51页 |
| ·鸭瘟病毒体外感染宿主细胞UL30基因的表达时相分析 | 第51-52页 |
| ·鸭胚成纤维细胞的培养与病毒感染 | 第51页 |
| ·细胞蛋白的提取 | 第51页 |
| ·SDS-PAGE | 第51页 |
| ·Western-blot分析 | 第51-52页 |
| 3.结果 | 第52-58页 |
| ·间接免疫荧光检测DPV UL30细胞定位方法的建立及优化 | 第52-57页 |
| ·间接免疫荧光检测DPV UL30基因表达产物细胞定位方法优化结果及抗体稀释度 | 第52-53页 |
| ·特异性试验 | 第53页 |
| ·DPV UL30基因表达产物细胞定位的动态监测 | 第53-57页 |
| ·DPV UL30基因表达产物在宿主细胞中的表达时相 | 第57-58页 |
| 4.讨论 | 第58-62页 |
| ·关于蛋白定位研究的方法 | 第58-59页 |
| ·关于DPV UL30在宿主细胞定位的时相分析 | 第59页 |
| ·DPV UL30宿主细胞定位与病毒增殖相关性的初步探讨 | 第59-60页 |
| ·关于Western-blot表达时相分析 | 第60-62页 |
| 第三部分 结论 | 第62-63页 |
| 第四部分 参考文献 | 第63-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 作者简介 | 第70页 |
