E.coli赖氨酰-tRNA合成酶（LysU）：结构与功能研究
| 致谢 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 插图清单 | 第11-14页 |
| 表格清单 | 第14-15页 |
| 附录清单 | 第15-16页 |
| 主要中英文缩写 | 第16-18页 |
| 目录 | 第18-22页 |
| 第1章 文献综述 | 第22-42页 |
| ·引言 | 第22页 |
| ·氨酰-tRNA合成酶 | 第22-32页 |
| ·tRNA~(aa)氨酰化反应 | 第22-24页 |
| ·氨酰-tRNA合成酶分类 | 第24-28页 |
| ·E.coli热诱导赖氨酰-tRNA合成酶 | 第28-32页 |
| ·二腺苷四磷酸 | 第32-39页 |
| ·二核苷多磷酸化合物 | 第33-34页 |
| ·LysU/Ap4A合成机理 | 第34-37页 |
| ·Ap4A的生物学功能 | 第37-39页 |
| ·Zn~(2+)在Ap4A合成中的作用 | 第39-42页 |
| 第2章 LysU三重催化活性研究 | 第42-49页 |
| ·引言 | 第42页 |
| ·实验结果 | 第42-45页 |
| ·建立多磷酸腺苷产物检测系统 | 第42-44页 |
| ·Ap_4A/Ap_3A/ADP三重催化活性 | 第44-45页 |
| ·讨论 | 第45-48页 |
| ·结论 | 第48-49页 |
| 第3章 LysU-Zn~(2+)活性结合位点研究 | 第49-81页 |
| ·引言 | 第49页 |
| ·实验流程 | 第49-50页 |
| ·实验结果 | 第50-76页 |
| ·锌离子结合位点预测 | 第50-53页 |
| ·蛋白突变体质粒构建 | 第53-55页 |
| ·蛋白突变体纯化表达 | 第55-58页 |
| ·蛋白突变体结构验证 | 第58-64页 |
| ·二级结构验证 | 第58页 |
| ·热诱导去折叠实验 | 第58-60页 |
| ·盐酸胍诱导变性实验 | 第60-64页 |
| ·突变体酶活性及Zn~(2+)敏感性实验 | 第64-70页 |
| ·分子动力学模拟 | 第70-76页 |
| ·动力学模拟轨迹分析 | 第70-71页 |
| ·体系结合自由能计算 | 第71-72页 |
| ·活性位点与底物作用距离计算 | 第72-76页 |
| ·讨论 | 第76-79页 |
| ·结论 | 第79-81页 |
| 第4章 LysU多功能催化活性研究 | 第81-106页 |
| ·引言 | 第81页 |
| ·甘油激酶活性研究 | 第81-98页 |
| ·未知产物确认 | 第81-83页 |
| ·组分差减实验 | 第83-84页 |
| ·甘油浓度实验 | 第84-86页 |
| ·金属离子依赖性实验 | 第86-87页 |
| ·蛋白质构象验证 | 第87页 |
| ·底物特异性分析 | 第87-89页 |
| ·Glycerol-Ap_4A调节反应 | 第89-91页 |
| ·突变体甘油激酶实验 | 第91-93页 |
| ·ITC底物结合实验 | 第93-94页 |
| ·三维结构分析 | 第94-96页 |
| ·讨论 | 第96-98页 |
| ·过氧化氢中和反应研究 | 第98-105页 |
| ·实验构思 | 第98页 |
| ·组分差减实验 | 第98-99页 |
| ·H_2O_2分解浓度实验 | 第99-102页 |
| ·蛋白质构象验证 | 第102页 |
| ·H_2O_2分解常数表征 | 第102-104页 |
| ·讨论 | 第104-105页 |
| ·结论 | 第105-106页 |
| 第5章 总结和后续研究展望 | 第106-109页 |
| ·论文总结 | 第106-107页 |
| ·论文创新点 | 第107页 |
| ·后续研究展望 | 第107-109页 |
| 第6章 实验材料和方法 | 第109-130页 |
| ·实验材料和仪器 | 第109-116页 |
| ·实验试剂 | 第109-111页 |
| ·实验仪器 | 第111-112页 |
| ·色谱柱 | 第112页 |
| ·菌株 | 第112页 |
| ·表达载体 | 第112-113页 |
| ·PCR引物 | 第113-115页 |
| ·培养基和抗生素 | 第115-116页 |
| ·实验方法 | 第116-130页 |
| ·质粒抽提 | 第116页 |
| ·限制性内切酶分析 | 第116页 |
| ·快速定点突变 | 第116-117页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第117-118页 |
| ·DNA片段连接 | 第118页 |
| ·感受态细胞制备及转化 | 第118页 |
| ·单克隆筛选和DNA测序 | 第118-119页 |
| ·重组蛋白诱导表达 | 第119页 |
| ·重组蛋白纯化 | 第119-120页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第120-121页 |
| ·圆二色光谱分析 | 第121-123页 |
| ·荧光光谱分析 | 第123页 |
| ·等温滴定量热法测底物结合 | 第123-125页 |
| ·荧光滴定法测底物结合 | 第125页 |
| ·Ap_4A/Ap_3A合成反应 | 第125-126页 |
| ·Ap_nA产物检测 | 第126页 |
| ·甘油激酶活性检测 | 第126-127页 |
| ·过氧化氢分解活性检测 | 第127页 |
| ·分子动力学模拟 | 第127-128页 |
| ·结合自由能计算 | 第128-130页 |
| 附录 | 第130-148页 |
| 参考文献 | 第148-160页 |
| 作者简历 | 第160页 |
