| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-9页 |
| 第1章 综述 | 第9-20页 |
| ·人类胰岛素简述 | 第9-11页 |
| ·人类胰岛素的化学结构 | 第9页 |
| ·人类胰岛素的生物学作用 | 第9-10页 |
| ·人类胰岛素缺乏症及治疗 | 第10-11页 |
| ·医用胰岛素的生产方法 | 第11-15页 |
| ·从动物的胰腺中直接提取 | 第11-12页 |
| ·人工合成或者转化的方法来制备 | 第12页 |
| ·通过基因工程的方法来制备 | 第12-15页 |
| ·家禽转基因技术的分类 | 第15-18页 |
| ·直接体内法 | 第15-17页 |
| ·间接体内法 | 第17-18页 |
| ·本课题的研究方法 | 第18页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| ·本课题的技术路线 | 第19-20页 |
| 第2章 人类胰岛素基因的克隆 | 第20-27页 |
| ·材料和仪器 | 第20页 |
| ·试剂及配制 | 第20页 |
| ·实验方法 | 第20-25页 |
| ·获取并保存人类胰腺 | 第20-21页 |
| ·提取人类胰腺细胞总RNA | 第21页 |
| ·甲醛凝胶电泳鉴定人类胰腺总RNA | 第21-22页 |
| ·设计引物 | 第22页 |
| ·RT-PCR 法制备INS 基因 | 第22-23页 |
| ·INS 基因的琼脂糖凝胶电泳鉴定 | 第23页 |
| ·PCR 法大量制备INS 基因 | 第23-24页 |
| ·INS 基因的回收 | 第24-25页 |
| ·INS 基因的进一步纯化 | 第25页 |
| ·结果与讨论 | 第25-27页 |
| 第3章 重组扩增质粒pUC57-INS 的构建 | 第27-35页 |
| ·材料和仪器 | 第27页 |
| ·试剂及配制 | 第27页 |
| ·实验方法 | 第27-33页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第27-28页 |
| ·T-载体pUC57 的连接 | 第28页 |
| ·pUC57-INS 转染大肠杆菌DH5α | 第28-29页 |
| ·含有pUC57-INS 阳性克隆菌的筛选 | 第29页 |
| ·阳性克隆菌的扩大培养及质粒的提取 | 第29-30页 |
| ·pUC57-INS 的琼脂糖凝胶电泳鉴定 | 第30-31页 |
| ·pUC57-INS 的回收 | 第31页 |
| ·pUC57-INS 的PCR 鉴定 | 第31-32页 |
| ·pUC57-INS 的双酶切鉴定 | 第32页 |
| ·pUC57-INS 的测序鉴定 | 第32-33页 |
| ·结果与讨论 | 第33-35页 |
| 第4章 重组表达质粒pEGFP-N1-INS 的构建 | 第35-44页 |
| ·材料和仪器 | 第35页 |
| ·试剂及配制 | 第35页 |
| ·实验方法 | 第35-41页 |
| ·表达质粒pEGFP-N1 的双酶切 | 第35-36页 |
| ·pEGFP-N1 的酶切产物的琼脂糖凝胶电泳 | 第36页 |
| ·线性片段pEGFP-N1 的回收 | 第36-37页 |
| ·pUC57―INS 的双酶切 | 第37页 |
| ·pUC57-INS 酶切产物琼脂糖凝胶电泳 | 第37页 |
| ·目的基因片段INS 的回收 | 第37页 |
| ·线性表达载体pEGFP-N1 与目的基因片段INS 的连接 | 第37-38页 |
| ·重组表达质粒pEGFP-N1―INS 的琼脂糖凝胶电泳鉴定 | 第38页 |
| ·pEGFP-N1-INS 的回收 | 第38页 |
| ·pEGFP-N1―INS 的PCR 鉴定 | 第38页 |
| ·pEGFP-N1-INS 的双酶切后电泳鉴定 | 第38页 |
| ·pEGFP-N1-INS 的测序 | 第38-39页 |
| ·pEGFP-N1-INS 转染于大肠杆菌DH5ａ | 第39页 |
| ·含有pEGFP-N1―INS 阳性克隆菌DH5ａ的筛选 | 第39-40页 |
| ·阳性菌的扩大培养及质粒提取 | 第40-41页 |
| ·重组表达质粒pEGFP-N1―INS 的琼脂糖凝胶电泳鉴定 | 第41页 |
| ·pEGFP-N1-INS 的回收和纯化 | 第41页 |
| ·结果与讨论 | 第41-44页 |
| 第5章 鸡胚细胞的转染 | 第44-50页 |
| ·材料和仪器 | 第44页 |
| ·试剂及配制 | 第44页 |
| ·实验方法 | 第44-45页 |
| ·转基因操作 | 第44页 |
| ·鸡胚的孵化 | 第44-45页 |
| ·对死胚和死亡雏鸡进行检测 | 第45页 |
| ·结果与讨论 | 第45-50页 |
| ·孵化及岀雏情况 | 第45-47页 |
| ·鸡胚组织荧光蛋白检测情况 | 第47-48页 |
| ·荧光蛋阳性的鸡胚组织PCR 检测情况 | 第48页 |
| ·存活雏鸡血液检测情况 | 第48-49页 |
| ·对制备转基因鸡研究的展望 | 第49-50页 |
| 第6章 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-55页 |
| 缩略语词汇表 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 攻读硕士学位期间发表的与学位论文相关的学术论文及专著 | 第57页 |
