| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 第一章 引言 | 第14-21页 |
| 1.1 棉铃虫危害情况概述 | 第14页 |
| 1.2 Bt菌简介 | 第14-16页 |
| 1.2.1 Bt蛋白 | 第14-15页 |
| 1.2.2 Bt蛋白的杀虫过程 | 第15-16页 |
| 1.3 Bt蛋白受体概述 | 第16-18页 |
| 1.3.1 钙黏蛋白(CAD) | 第16页 |
| 1.3.2 碱性磷酸酯酶(ALP) | 第16-17页 |
| 1.3.3 氨肽酶(APN) | 第17页 |
| 1.3.4 三磷酸腺苷结合盒转运蛋白(ABC转运蛋白) | 第17-18页 |
| 1.3.5 其他受体蛋白 | 第18页 |
| 1.4 Bt蛋白的抗性产生的原因 | 第18-19页 |
| 1.5 Cry1A和 Cry2A类蛋白受体研究概况 | 第19-20页 |
| 1.6 Bt抗性治理策略 | 第20页 |
| 1.7 本研究的内容、目的和意义 | 第20-21页 |
| 第二章 棉铃虫ABCC1 基因克隆及序列分析 | 第21-35页 |
| 2.1 材料与方法 | 第21-28页 |
| 2.1.1 供试昆虫 | 第21页 |
| 2.1.2 主要试剂和仪器 | 第21-22页 |
| 2.1.3 棉铃虫中肠RNA的提取 | 第22-23页 |
| 2.1.4 棉铃虫中肠cDNA的合成 | 第23页 |
| 2.1.5 3′RACE及5′RACE模板的合成 | 第23-24页 |
| 2.1.6 引物的设计与合成 | 第24页 |
| 2.1.7 普通PCR反应体系及条件 | 第24-26页 |
| 2.1.8 PCR产物的回收、转化和测序鉴定 | 第26-27页 |
| 2.1.9 ABCC1 序列分析和系统发育树的构建 | 第27-28页 |
| 2.2 结果分析 | 第28-33页 |
| 2.2.1 普通PCR及 RACE-PCR结果 | 第28-31页 |
| 2.2.2 ABCC1 序列分析 | 第31-32页 |
| 2.2.3 ABCC1 序列进化树分析 | 第32-33页 |
| 2.3 讨论 | 第33-35页 |
| 第三章 棉铃虫ABCC1 基因在不同龄期和组织中的表达量 | 第35-39页 |
| 3.1 材料方法 | 第35-37页 |
| 3.1.1 供试昆虫 | 第35页 |
| 3.1.2 主要试剂和仪器 | 第35页 |
| 3.1.3 取样与方法 | 第35页 |
| 3.1.4 RNA的提取及cDNA第一链的合成 | 第35页 |
| 3.1.5 荧光定量PCR分析 | 第35-37页 |
| 3.1.6 数据处理 | 第37页 |
| 3.2 结果与分析 | 第37-38页 |
| 3.2.1 不同龄期棉铃虫ABCC1 在转录水平的表达量 | 第37页 |
| 3.2.2 棉铃虫幼虫不同组织中ABCC1 在转录水平的表达量 | 第37-38页 |
| 3.3 讨论 | 第38-39页 |
| 第四章 ABCC1 跨膜区原核表达及结合能力分析 | 第39-48页 |
| 4.1 材料与方法 | 第39-44页 |
| 4.1.1 供试昆虫 | 第39页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第39-41页 |
| 4.1.3 仪器设备 | 第41页 |
| 4.1.4 RNA的提取及cDNA的合成 | 第41-42页 |
| 4.1.5 PCR扩增两个跨膜区(TMD1、TMD2) | 第42页 |
| 4.1.6 PCR产物的回收、转化和测序鉴定 | 第42页 |
| 4.1.7 双酶切及重组表达载体构建 | 第42页 |
| 4.1.8 转化及阳性克隆鉴定 | 第42-43页 |
| 4.1.9 ABCC1 跨膜区片段的原核表达 | 第43页 |
| 4.1.10 SDS-PAGE电泳及凝胶染色 | 第43页 |
| 4.1.11 ABCC1 跨膜区片段的纯化 | 第43页 |
| 4.1.12 Ligand blot检测 | 第43-44页 |
| 4.2 结果与分析 | 第44-47页 |
| 4.2.1 棉铃虫ABCC1 两个跨膜区蛋白原核表达结果 | 第44-45页 |
| 4.2.2 Ligand blot实验结果分析 | 第45-47页 |
| 4.3 讨论 | 第47-48页 |
| 第五章 棉铃虫ABCC1 基因的功能研究 | 第48-54页 |
| 5.1 材料与方法 | 第48-50页 |
| 5.1.1 供试昆虫 | 第48页 |
| 5.1.2 供试试剂与仪器设备 | 第48页 |
| 5.1.3 合成siRNA及稀释备用 | 第48页 |
| 5.1.4 注射siRNA及基因干扰效率的检测 | 第48-49页 |
| 5.1.5 基因干扰后的生物测定 | 第49页 |
| 5.1.6 Sf9 昆虫细胞培养 | 第49页 |
| 5.1.7 Cry2Ab、Cry1Ac细胞生测蛋白制备 | 第49页 |
| 5.1.8 pAc-ABCC1 重组质粒的构建 | 第49页 |
| 5.1.9 细胞转染及细胞生测 | 第49-50页 |
| 5.2 结果与分析 | 第50-53页 |
| 5.2.1 qPCR检测注射后的干扰效率 | 第50页 |
| 5.2.2 ABCC1 基因沉默后对棉铃虫Cry2Ab、Cry1Ac蛋白敏感性的变化 | 第50-51页 |
| 5.2.3 细胞转染后ABCC1 基因的PCR检测 | 第51-52页 |
| 5.2.4 细胞转染后对Cry2Ab蛋白敏感性的变化 | 第52-53页 |
| 5.3 讨论 | 第53-54页 |
| 第六章 Cry1Ac抗性棉铃虫与敏感棉铃虫ABCC1 基因的比较 | 第54-57页 |
| 6.1 材料与方法 | 第54页 |
| 6.1.1 供试昆虫 | 第54页 |
| 6.1.2 供试试剂与仪器设备 | 第54页 |
| 6.1.3 氨基酸序列对比分析 | 第54页 |
| 6.1.4 在棉铃虫抗感品系中ABCC1 表达量差异分析 | 第54页 |
| 6.2 结果与分析 | 第54-56页 |
| 6.2.1 ABCC1 基因在抗性及敏感棉铃虫品系中编码区氨基酸序列比对 | 第54-56页 |
| 6.2.2 在棉铃虫抗感品系中ABCC1 表达量差异分析结果 | 第56页 |
| 6.3 讨论 | 第56-57页 |
| 第七章 全文总结 | 第57-59页 |
| 7.1 主要结论 | 第57页 |
| 7.2 创新点 | 第57页 |
| 7.3 问题和展望 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 作者简介 | 第70-71页 |
