| 摘要 | 第5-8页 |
| abstract | 第8-10页 |
| 第1章 绪论 | 第14-34页 |
| 1.1 文蛤生物学 | 第14-15页 |
| 1.1.1 文蛤的分类地位和经济价值 | 第14页 |
| 1.1.2 文蛤的养殖和病害 | 第14-15页 |
| 1.2 贝类病害与免疫防御 | 第15-22页 |
| 1.2.1 双壳贝类的疾病感染 | 第15-16页 |
| 1.2.2 贝类防御系统的组成 | 第16-22页 |
| 1.3 小眼畸形相关转录因子MITF | 第22-26页 |
| 1.3.1 MITF基因和蛋白 | 第22-24页 |
| 1.3.2 MITF亚型 | 第24-25页 |
| 1.3.3 MITF表达调控 | 第25-26页 |
| 1.4 MITF通路调控机制 | 第26-33页 |
| 1.4.1 MITF下游靶基因分类 | 第27-29页 |
| 1.4.2 MITF主要下游靶基因的功能 | 第29-31页 |
| 1.4.3 MITF与蛋白质相互作用 | 第31-33页 |
| 1.5 本研究的内容和意义 | 第33-34页 |
| 第2章 文蛤MITF家族的鉴定及功能分析 | 第34-61页 |
| 2.1 研究背景 | 第34页 |
| 2.2 材料与方法 | 第34-41页 |
| 2.2.1 实验动物 | 第34-35页 |
| 2.2.2 实验引物 | 第35-36页 |
| 2.2.3 RNA、DNA提取和c DNA的合成 | 第36页 |
| 2.2.4 文蛤MpMITF基因c DNA全长克隆及序列分析 | 第36-37页 |
| 2.2.5副溶血弧菌感染实验 | 第37-38页 |
| 2.2.6 荧光定量PCR | 第38-39页 |
| 2.2.7 Western blot分析 | 第39页 |
| 2.2.8 SNP筛选及分型 | 第39-40页 |
| 2.2.9 RNA干扰 | 第40-41页 |
| 2.2.10 数据分析 | 第41页 |
| 2.3 结果 | 第41-56页 |
| 2.3.1 MpMITF基因序列分析 | 第41-44页 |
| 2.3.2 MpMITF的组织分布情况 | 第44-45页 |
| 2.3.3 MpMITF-1 与副溶血弧菌抗性的关联分析 | 第45-52页 |
| 2.3.4 MpMITF-2 与文蛤壳色的关联分析 | 第52-56页 |
| 2.4 讨论 | 第56-60页 |
| 2.4.1 文蛤中MITF基因的鉴定 | 第56-57页 |
| 2.4.2 MpMITF-1 基因参与文蛤对弧菌的免疫响应 | 第57-58页 |
| 2.4.3 MpMITF-2 基因参与文蛤壳色的形成 | 第58-60页 |
| 2.5 小结 | 第60-61页 |
| 第3章 文蛤MITF下游靶基因的筛选鉴定 | 第61-77页 |
| 3.1 研究背景 | 第61-62页 |
| 3.2 材料与方法 | 第62-64页 |
| 3.2.1 实验动物 | 第62页 |
| 3.2.2 实验引物 | 第62页 |
| 3.2.3 RNA提取和cDNA合成 | 第62-63页 |
| 3.2.4 cDNA全长序列扩增及序列分析 | 第63页 |
| 3.2.5 荧光定量PCR | 第63页 |
| 3.2.6 RNA干扰 | 第63页 |
| 3.2.7 数据分析 | 第63-64页 |
| 3.3 结果 | 第64-75页 |
| 3.3.1 MpMITF下游基因的初步筛选 | 第64-65页 |
| 3.3.2 下游基因的序列分析 | 第65-69页 |
| 3.3.3 下游基因的进化分析 | 第69-71页 |
| 3.3.4 下游基因的组织表达分析 | 第71-72页 |
| 3.3.5 下游基因在副溶血弧菌刺激后的表达分析 | 第72-73页 |
| 3.3.6 下游基因表达量在文蛤家系中的验证 | 第73-75页 |
| 3.4 讨论 | 第75-76页 |
| 3.5 小结 | 第76-77页 |
| 第4章 文蛤MITF下游靶基因的功能分析 | 第77-96页 |
| 4.1 研究背景 | 第77-78页 |
| 4.2 材料与方法 | 第78-85页 |
| 4.2.1 实验动物 | 第78页 |
| 4.2.2 实验引物 | 第78页 |
| 4.2.3 启动子扩增 | 第78-80页 |
| 4.2.4 蛋白重组表达 | 第80-81页 |
| 4.2.5 凝胶电泳迁移实验 | 第81-83页 |
| 4.2.6 酵母单杂交实验 | 第83页 |
| 4.2.7 Western blot分析 | 第83页 |
| 4.2.8 抑菌实验 | 第83-84页 |
| 4.2.9 细胞凋亡率检测 | 第84-85页 |
| 4.3 结果 | 第85-93页 |
| 4.3.1 下游基因启动子的扩增 | 第85-87页 |
| 4.3.2 MpMITF、MpCTSK和 MpPO蛋白的重组表达 | 第87-88页 |
| 4.3.3 MpMITF与下游基因之间的相互作用 | 第88-89页 |
| 4.3.4 MpMITF激活下游基因的转录 | 第89-90页 |
| 4.3.5 MpPO和 MpCTSK蛋白的抑菌活性检测 | 第90-92页 |
| 4.3.6 MpBCL-2 的抑凋亡活性检测 | 第92-93页 |
| 4.4 讨论 | 第93-95页 |
| 4.5 小结 | 第95-96页 |
| 第5章 上游关键基因对文蛤MITF的调控机制分析 | 第96-113页 |
| 5.1 研究背景 | 第96-97页 |
| 5.2 材料与方法 | 第97-99页 |
| 5.2.1 实验动物 | 第97页 |
| 5.2.2 实验引物 | 第97-98页 |
| 5.2.3 RNA提取和cDNA合成 | 第98页 |
| 5.2.4 cDNA全长序列扩增及序列分析 | 第98页 |
| 5.2.5 荧光定量PCR | 第98页 |
| 5.2.6 Western blot分析 | 第98页 |
| 5.2.7 酵母双杂交实验(Yeast two-hybrid assay) | 第98-99页 |
| 5.3 结果 | 第99-109页 |
| 5.3.1 MpP38和MpP300 序列分析 | 第99-104页 |
| 5.3.2 MpMITF与上游基因的相互作用 | 第104-105页 |
| 5.3.3 副溶血弧菌浸泡刺激后MpP38和MpP300 基因的表达量变化 | 第105-107页 |
| 5.3.4 MpP38对MpMITF蛋白的调控机制 | 第107-109页 |
| 5.3.5 MpP300对MpMITF蛋白的调控机制 | 第109页 |
| 5.4 讨论 | 第109-112页 |
| 5.5 小结 | 第112-113页 |
| 结论 | 第113-116页 |
| 参考文献 | 第116-142页 |
| 致谢 | 第142-144页 |
| 作者简历及攻读学位期间发表的学术论文与研究成果 | 第144页 |
