| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 缩略词表 | 第8-14页 |
| 第一章 研究背景 | 第14-34页 |
| 1.1.引言 | 第14页 |
| 1.2.生殖系统 | 第14-26页 |
| 1.2.1.性腺的形成过程 | 第14-15页 |
| 1.2.2.生殖细胞的发育过程 | 第15-16页 |
| 1.2.3.PGCs的决定机制 | 第16-17页 |
| 1.2.4.PGCs迁移的机制 | 第17-18页 |
| 1.2.5.PGCs的表观遗传重组 | 第18页 |
| 1.2.6.卵母细胞成熟过程 | 第18-19页 |
| 1.2.7.卵泡发育及生物学(BP)过程 | 第19-26页 |
| 1.3.干细胞 | 第26-31页 |
| 1.3.1.细胞类型 | 第26-27页 |
| 1.3.2.干细胞 | 第27-28页 |
| 1.3.3.干细胞的纯化 | 第28-29页 |
| 1.3.4.干细胞的分子生物学特征 | 第29-30页 |
| 1.3.5.干细胞的微环境与归巢现象 | 第30页 |
| 1.3.6.干细胞的应用 | 第30-31页 |
| 1.4.雌性生殖干细胞的研究 | 第31-33页 |
| 1.4.1.雌性生殖干细胞的发现 | 第31-32页 |
| 1.4.2.雌性生殖干细胞的分离 | 第32-33页 |
| 1.4.3.雌性生殖干细胞的性质 | 第33页 |
| 1.5.卵巢早衰与不育模型 | 第33页 |
| 1.6.研究意义 | 第33-34页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第34-55页 |
| 2.1.实验仪器与试剂 | 第34页 |
| 2.2.实验动物 | 第34页 |
| 2.3.饲养层的准备 | 第34-36页 |
| 2.3.1.STO细胞的复苏 | 第34页 |
| 2.3.2.STO细胞的传代培养 | 第34-35页 |
| 2.3.3.STO细胞的换液 | 第35页 |
| 2.3.4.STO细胞的冻存 | 第35页 |
| 2.3.5.饲养层的制备 | 第35-36页 |
| 2.4.雌性生殖干细胞的分离培养 | 第36-38页 |
| 2.4.1.雌性生殖干细胞的分离 | 第36-37页 |
| 2.4.2.雌性生殖干细胞的纯化 | 第37页 |
| 2.4.3.雌性生殖干细胞的换液 | 第37页 |
| 2.4.4.雌性生殖干细胞的传代 | 第37-38页 |
| 2.4.5.雌性生殖干细胞的冻存与复苏 | 第38页 |
| 2.5.逆转录合成cDNA | 第38-39页 |
| 2.5.1.RNA的提取 | 第38-39页 |
| 2.5.2.cDNA的合成 | 第39页 |
| 2.5.3.单细胞或单卵泡的cDNA合成 | 第39页 |
| 2.6.鼠尾DNA的提取 | 第39-40页 |
| 2.7.PCR | 第40-42页 |
| 2.7.1.普通PCR | 第40-41页 |
| 2.7.2.实时定量PCR | 第41页 |
| 2.7.3.单细胞PCR | 第41页 |
| 2.7.4.琼脂糖凝胶电泳 | 第41-42页 |
| 2.8.核型分析 | 第42页 |
| 2.9.细胞的免疫荧光染色检测 | 第42-43页 |
| 2.10.Brdu的免疫荧光染色检测 | 第43页 |
| 2.11.不育小鼠模型的制备 | 第43-44页 |
| 2.11.1.药物不育模型 | 第43-44页 |
| 2.11.2.条件性基因(pten)敲除卵巢早衰模型 | 第44页 |
| 2.12.体内移植 | 第44页 |
| 2.13.组织的石蜡包埋 | 第44-45页 |
| 2.14.切片苏木精染色 | 第45页 |
| 2.15.切片的免疫荧光化学 | 第45-46页 |
| 2.16.Southern blotting | 第46-50页 |
| 2.16.1.基因组DNA的酶切处理 | 第46页 |
| 2.16.2.凝胶分离酶切基因组DNA | 第46-47页 |
| 2.16.3.GFP探针制备 | 第47-49页 |
| 2.16.4.探针标记 | 第49页 |
| 2.16.5.杂交 | 第49页 |
| 2.16.6.洗膜 | 第49-50页 |
| 2.16.7.显影 | 第50页 |
| 2.17.单卵泡测序 | 第50-53页 |
| 2.17.1.样品准备 | 第50页 |
| 2.17.2.cDNA第一条链的合成 | 第50-51页 |
| 2.17.3.cDNA第一条链的纯化 | 第51页 |
| 2.17.4.单链cDNA扩增 | 第51-52页 |
| 2.17.5.扩增后双链cDNA的纯化 | 第52页 |
| 2.17.6.上机测序 | 第52-53页 |
| 2.18.生物信息分析 | 第53-55页 |
| 2.18.1.原始数据处理 | 第53页 |
| 2.18.2.数据分析 | 第53-55页 |
| 第三章 实验结果 | 第55-87页 |
| 3.1.雌性生殖干细胞的分离纯化、长期培养与鉴定 | 第55-61页 |
| 3.1.1.雌性生殖干细胞的分离纯化、长期培养 | 第55-59页 |
| 3.1.2.雌性生殖干细胞标志物的鉴定 | 第59-60页 |
| 3.1.3.核型分析 | 第60-61页 |
| 3.2.追踪移植于体内后的雌性生殖干细胞发育 | 第61-68页 |
| 3.2.1.雌性不育小鼠的构建 | 第61-63页 |
| 3.2.2.雌性生殖干细胞的移植和体内追踪 | 第63-68页 |
| 3.3.FGSCs移植恢复不育小鼠的生殖能力 | 第68-72页 |
| 3.3.1.FGSCs移植后卵巢形态学鉴定 | 第68-69页 |
| 3.3.2.FGSCs细胞移植后产生后代 | 第69-70页 |
| 3.3.3.后代小鼠的鉴定 | 第70-72页 |
| 3.4.移植细胞的卵泡发育 | 第72-87页 |
| 3.4.1.卵巢功能恢复过程中卵泡发生的基因调控网络分析 | 第78-84页 |
| 3.4.2.卵泡发育过程中的可变剪切(Alternative Splicing,ASs)的动态分析 | 第84-87页 |
| 第四章 讨论 | 第87-90页 |
| 4.1.雌性生殖干细胞的体内定位和分化 | 第87页 |
| 4.2.雌性生殖干细胞移植后的卵泡发育 | 第87-88页 |
| 4.3.可变剪切对卵泡发育的影响 | 第88-89页 |
| 4.4.卵泡发育中可能的关键基因 | 第89页 |
| 4.5.雌性生殖干细胞移植恢复不育小鼠的生殖能力 | 第89-90页 |
| 第五章 全文总结 | 第90-92页 |
| 5.1.主要创新点 | 第90页 |
| 5.2.主要结论 | 第90-91页 |
| 5.3.研究展望 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-104页 |
| 附录 Ⅰ 实验仪器 | 第104-107页 |
| 附录 Ⅱ 材料与试剂 | 第107-110页 |
| 附录 Ⅲ 试剂的配制方法 | 第110-119页 |
| 附录 Ⅳ 引物 | 第119-122页 |
| 附录 Ⅴ 子热图基因列表 | 第122-124页 |
| 附录 Ⅵ SAF模块内的用于共表达网络分析的基因列表 | 第124-131页 |
| 附录 Ⅶ PF模块内用于构建共表达网络的基因列表 | 第131-141页 |
| 致谢 | 第141-142页 |
| 攻读博士学位期间已发表或录用的论文 | 第142-143页 |
| 攻读博士学位期间参与的国家项目 | 第143-145页 |
