摘要 | 第8-10页 |
第一章 文献综述 | 第10-16页 |
1 DREB转录因子简介 | 第10-11页 |
2 DREB转录因子研究进展 | 第11-12页 |
2.1 DREB转录因子的作用方式 | 第11-12页 |
2.2 大豆GmDREB类转录因子转化小麦的研究 | 第12页 |
3 本研究的目的意义和主要研究内容 | 第12-15页 |
3.1 转GmDREB3基因小麦T5代株系分子鉴定 | 第13页 |
3.2 转GmDREB3基因小麦T5代株系产量及农艺性状的表现 | 第13-14页 |
3.3 转GmDREB3基因小麦T5代株系生理生化指标测定 | 第14页 |
3.4 GmDREB3蛋白稳定性试验 | 第14-15页 |
4 技术路线 | 第15-16页 |
第二章 转GmDREB3小麦T5代株系的分子鉴定 | 第16-30页 |
1 材料 | 第16页 |
1.1 试验材料及取样 | 第16页 |
1.2 主要试剂 | 第16页 |
1.3 主要仪器 | 第16页 |
2 试验方法 | 第16-23页 |
2.1 小麦DNA提取及PCR鉴定 | 第16-18页 |
2.2 小麦RNA提取、RNA反转录及RT-PCR | 第18页 |
2.3 Southern Blot分析转基因小麦拷贝数 | 第18-21页 |
2.3.1 大提小麦叶片基因组及纯化 | 第18-19页 |
2.3.2 小麦基因组酶切及酶切产物纯化 | 第19页 |
2.3.3 探针的标记与纯化 | 第19-20页 |
2.3.4 琼脂糖凝胶电泳及转膜 | 第20页 |
2.3.5 杂交 | 第20页 |
2.3.6 洗膜与显色 | 第20-21页 |
2.4 小麦各组织蛋白提取及ELISA测定 | 第21-23页 |
2.4.1 GmDREB3基因大肠杆菌转化、单克隆挑选、摇菌及菌液PCR检测 | 第21-22页 |
2.4.2 GmDREB3基因原核诱导表达蛋白 | 第22页 |
2.4.3 原核诱导蛋白纯化 | 第22页 |
2.4.4 蛋白凝胶的制备及SDS-PAGE凝胶电泳 | 第22页 |
2.4.5 绘制标准曲线 | 第22-23页 |
2.4.6 植物蛋白提取与定量分析 | 第23页 |
3 结果分析 | 第23-27页 |
3.1 转GmDREB3基因小麦PCR检测 | 第23-24页 |
3.2 转基因16SY鉴318株系的RT-PCR分析 | 第24-25页 |
3.3 转基因16SY鉴318株系的Southern Blot分析 | 第25-26页 |
3.4 转基因16SY鉴318株系各组织目标蛋白表达量的ELISA测定结果 | 第26-27页 |
4 讨论 | 第27-29页 |
4.1 转基因小麦的PCR检测 | 第27-28页 |
4.2 转基因小麦的Southern Blot | 第28页 |
4.3 驱动转基因表达的启动子特征分析 | 第28-29页 |
5 小结 | 第29-30页 |
第三章 转GmDREB3小麦田间抗旱性及农艺性状分析 | 第30-36页 |
1 材料 | 第30页 |
1.1 试验材料 | 第30页 |
1.2 主要仪器 | 第30页 |
2 试验方法 | 第30-31页 |
2.1 转基因株系及受体株系亩产测定 | 第30页 |
2.2 转基因株系及受体株系株高 | 第30页 |
2.3 转基因株系及受体株系亩穗数 | 第30页 |
2.4 转基因株系及受体株系穗粒数 | 第30页 |
2.5 转基因株系及受体株系穗粒重 | 第30-31页 |
2.6 转基因株系及受体株系千粒重 | 第31页 |
2.7 数据分析 | 第31页 |
3 结果分析 | 第31-34页 |
3.1 转GmDREB3基因各株系的产量表现 | 第31-32页 |
3.2 转GmDREB3基因各株系农艺性状分析 | 第32-34页 |
4 讨论 | 第34-35页 |
4.1 小麦产量、抗旱指数与抗旱性的关系 | 第34页 |
4.2 转GmDREB3基因各株系农艺性状与抗旱性的关系 | 第34-35页 |
5 小结 | 第35-36页 |
第四章 转GmDREB3小麦灌浆期生理性状测定与分析 | 第36-42页 |
1 材料 | 第36页 |
1.1 试验材料 | 第36页 |
1.2 主要仪器 | 第36页 |
2 试验方法 | 第36-37页 |
2.1 转基因株系及受体株系灌浆期叶绿素含量测定 | 第36页 |
2.2 转基因株系及受体株系灌浆期叶绿素荧光动力学参数Fv/Fm测定 | 第36页 |
2.3 转基因株系及受体株系灌浆期气冠温差测定 | 第36页 |
2.4 数据分析 | 第36-37页 |
3 结果分析 | 第37-40页 |
3.1 转GmDREB3基因小麦株系和对照株系灌浆期表型 | 第37-38页 |
3.2 转GmDREB3基因小麦叶绿素含量分析 | 第38页 |
3.3 转GmDREB3基因小麦叶绿素荧光动力学参数Fv/Fm分析 | 第38-39页 |
3.4 转GmDREB3基因小麦气冠温差分析 | 第39-40页 |
4 讨论 | 第40-41页 |
4.1 GmDREB3基因对转基因作物生理生化指标以及抗逆性的影响 | 第40页 |
4.2 叶绿素含量、叶绿素荧光动力学参数、气冠温差反映植物的抗旱能力 | 第40-41页 |
5 小结 | 第41-42页 |
第五章 GmDREB3蛋白稳定性分析 | 第42-51页 |
1 材料 | 第42页 |
1.1 供试材料 | 第42页 |
1.2 主要试剂 | 第42页 |
1.3 主要仪器 | 第42页 |
2 试验方法 | 第42-45页 |
2.1 GmDREB3基因大肠杆菌转化、单克隆挑选、摇菌及菌液PCR检测 | 第42页 |
2.2 GmDREB3基因原核诱导表达蛋白 | 第42-43页 |
2.3 蛋白纯化 | 第43页 |
2.4 蛋白凝胶的制备及SDS-PAGE凝胶电泳 | 第43页 |
2.5 模拟胃液消化GmDREB3蛋白稳定性试验 | 第43页 |
2.6 模拟肠液消化GmDREB3蛋白稳定性试验 | 第43-44页 |
2.7 GmDREB3蛋白热稳定性试验 | 第44页 |
2.8 热处理蛋白Western Blot | 第44-45页 |
2.9 热处理蛋白ELISA测定 | 第45页 |
3 结果分析 | 第45-49页 |
3.1 GmDREB3基因单克隆菌落和菌液PCR检测 | 第45页 |
3.2 原核诱导表达蛋白及纯化蛋白分析 | 第45-46页 |
3.3 GmDREB3蛋白模拟胃液消化稳定性分析 | 第46-47页 |
3.4 GmDREB3蛋白模拟肠液消化稳定性分析 | 第47页 |
3.5 GmDREB3蛋白热处理稳定性分析 | 第47-49页 |
4 讨论 | 第49-50页 |
4.1 GmDREB3基因原核表达蛋白条件与表达量 | 第49页 |
4.2 GmDREB3蛋白稳定性与转基因食品安全的相关性 | 第49-50页 |
5 小结 | 第50-51页 |
参考文献 | 第51-56页 |
ABSTRACT | 第56-58页 |
附录1 大豆GmDREB3基因序列(共597 bp) | 第60-61页 |
附录2 大豆GmDREB3基因氨基酸序列(共198个氨基酸) | 第61-62页 |
附录3 玉米Ubiquitin promoter基因序列(共1986 bp) | 第62-64页 |
附录4 NOS终止子序列(共253 bp) | 第64-66页 |
致谢 | 第66页 |